بررسی الگوی رهش DNA و بازده انتقال ژن PEI/DNA کپسوله شده با کوپلیمر میسلی حاویPLA و PEG
The study of release DNA and transfection efficiency of PEI / DNA, encapsulated by copolymer micelles containing PLA and PEG
مجریان: علی اصغر حمیدی
خلاصه روش اجرا: جهت آماده سازی کوپلیمر PLA-PEG-PLAحاوی DNA (پلاسمیدی pEGFP-N1) و PEI/DNA در نسبت¬های (N/P) متفاوت از تکنیک Water-in-oil solvent diffusion technique استفاده خواهد شد (پرز و همکاران، 2001) ذرات مورد نظر توسط سانتریفیوژ جمع آوری شده و سوپرناتانت آن جهت محاسبه درصد بار گذاری DNA، در nm260 اسپکت و عدد جزبی آن با عدد جزبی گرفته شده در nm260 از DNA اولیه مورد استفاده در فرایند کپسوله سازی مقایسه می¬گردد. همچنین مرفولوژی و اندازه میسل¬¬های حاصل به ترتیب توسط میکروسکوپ الکترونی نگاره (SEM) (20) و DLS مورد بررسی قرار خواهد گرفت. زیست سازگاری کوپلیمرPLA-PEG-PLA، PLA-PEG-PLA/DNA،(PLA-PEG-PLA/PEI/DNA،PEI/DNA در غلظت¬های متفاوت N/P) و لیپوزوم در تکرارهای متعدد، توسط تست MTT انجام خواهد شد (4). جهت بررسی الگوی رهش DNA و DNA/PEI از کوپلیمرPLA-PEG-PLA از دستگاه اسپکتروفتومتر استفاده خواهد شد. سلول¬های MCF-7 در محیط کشت RPMI 1640 حاوی FBS 10 درصد و آنتی بیوتیک کشت داده خواهند شد سپس توسط PLA-PEG-PLA/DNA،(PLA-PEG-PLA/PEI/DNA،PEI/DNA در غلظت¬های متفاوت N/P) در تکرارها متفاوت (با مقدار ثابت DNAی پلاسمیدی برای تمامی تیمارها) ترانسفکت شده و جهت بررسی بیان ژن از دستگاه فلوئورسایتومتری استفاده خواهد شد (از DNA فاقد پوشش به عنوان کنترل مثبت و از DNA کپسوله شده با لیپوزوم به عنوان کنترل مثبت استفاده خواهد شد). این آزمایش¬ها در قالب طرح کامل تصادفی و مقایسه میانگین تیمارها به روش دانکن انجام خواهد شد. در صورتی که داده¬ها توزیع نرمال نداشته باشند از تبدیل داده استفاده خواهد شد که انجام این آنالیزها با نرم افزار SAS خواهد بود.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 60461 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی الگوی رهش DNA و بازده انتقال ژن PEI/DNA کپسوله شده با کوپلیمر میسلی حاویPLA و PEG |
| عنوان لاتین طرح | The study of release DNA and transfection efficiency of PEI / DNA, encapsulated by copolymer micelles containing PLA and PEG |
| نوع طرح | طرح تحقیقاتی |
| اولویت طرح | مطالعات پایه ای شناختی و رفتاری |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | خير |
| مقطع پایان نامه | |
| مدت اجرا - ماه | 12 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | با توجه به سهولت در اتصال لیگاند به کوپلیمرهای PLA-PEG، الگوی رهایش منحصر به فرد و همچنین توانایی تغییر در شکل ذرات، اندازه ذرات، الگوی رهش دارو با تغیر نسبت، طول زنجیره PLA/PEG و تکنیک تیهه ذرات می¬توان از نتایج این پژوهش در هدف درمانی مبتنی بر نانوداروهای هوشمند استفاده نمود. |
| اهداف اختصاصی | بررسی زیست سازگاری کوپلیمر PLA-PEG-PLA، PLA-PEG-PLA/DNA، PLA-PEG-PLA/PEI/DNA، PEI و لیپوزوم بر روی سلول­های MCF-7 -بررسی الگوی رهش DNA از ذرات PLA-PEG-PLA/DNA، PLA-PEG-PLA/PEI/DNA و تاثیر درجه حرارت بر رهش DNA از این ذرات -بررسی توانایی ذرات PLA-PEG-PLA/DNA، PLA-PEG-PLA/PEI/DNA در انتقال ژن به سلول­های MCF-7 و مقایسه بازده انتقال ژن با PEI و لیپوزوم |
| چکیده انگلیسی طرح | جهت آماده سازی کوپلیمر PLA-PEG-PLAحاوی DNA (پلاسمیدی pEGFP-N1) و PEI/DNA در نسبت¬های (N/P) متفاوت از تکنیک Water-in-oil solvent diffusion technique استفاده خواهد شد (پرز و همکاران، 2001) ذرات مورد نظر توسط سانتریفیوژ جمع آوری شده و سوپرناتانت آن جهت محاسبه درصد بار گذاری DNA، در nm260 اسپکت و عدد جزبی آن با عدد جزبی گرفته شده در nm260 از DNA اولیه مورد استفاده در فرایند کپسوله سازی مقایسه می¬گردد. همچنین مرفولوژی و اندازه میسل¬¬های حاصل به ترتیب توسط میکروسکوپ الکترونی نگاره (SEM) (20) و DLS مورد بررسی قرار خواهد گرفت. زیست سازگاری کوپلیمرPLA-PEG-PLA، PLA-PEG-PLA/DNA،(PLA-PEG-PLA/PEI/DNA،PEI/DNA در غلظت¬های متفاوت N/P) و لیپوزوم در تکرارهای متعدد، توسط تست MTT انجام خواهد شد (4). جهت بررسی الگوی رهش DNA و DNA/PEI از کوپلیمرPLA-PEG-PLA از دستگاه اسپکتروفتومتر استفاده خواهد شد. سلول¬های MCF-7 در محیط کشت RPMI 1640 حاوی FBS 10 درصد و آنتی بیوتیک کشت داده خواهند شد سپس توسط PLA-PEG-PLA/DNA،(PLA-PEG-PLA/PEI/DNA،PEI/DNA در غلظت¬های متفاوت N/P) در تکرارها متفاوت (با مقدار ثابت DNAی پلاسمیدی برای تمامی تیمارها) ترانسفکت شده و جهت بررسی بیان ژن از دستگاه فلوئورسایتومتری استفاده خواهد شد (از DNA فاقد پوشش به عنوان کنترل مثبت و از DNA کپسوله شده با لیپوزوم به عنوان کنترل مثبت استفاده خواهد شد). |
| کلمات کلیدی | نانوتکنولوژی: به طراحی، تعیین ویژگیها، تولید و کاربرد مواد، ابزار آلات و سیستمها با کنترل شکل و اندازه در مقیاس نانو میگویند نانوذرات: به ذراتی که اندازه آن در حدود 1 تا 100 نانومتر باشد نانوذرات گفته می¬شود. پلیمرهای زیست تخریب پذیر: به پلیمرهای گفته می¬شود که به سادگی توسط فعالیت موجودات زنده به زیرواحدهای سازنده خود تجزیه شده و بنابراین در محیط باقی نمی مانند. نانوذرات های قطعه ای دوگانه دوست: نانوذراتی که از قطعات پلیمری متفاوتی تشکیل شده و دارای یک بخش آب دوست و یک بخش آبگریز می باشند لیگاند: به ماده¬ای گفته می¬شود که با پیوند و ترکیب با یک بیومولکول یا یک گیرنده، هدف بیوشیمیایی خاصی را دنبال کند. هدف گیری فعال: زمانی که از سیگنال پپتید، برهمکنش آنتیبادیــ آنتیژن و یا لیگاندــگیرنده به منظور انتقال ماکروملکولی به سلول، یا بافت خاصی استفاده میگردد هدف¬گیری فعال نامیده می¬شود. ترانسفکشن: انتقال DNAبه سلول های یوکاریوتی عموماً ترانسفکشن نامیده می شود هیپرترمیا : هیپرترمیا که به آن گرما درمانی یا حرارت درمانی نیز میگویند. به طور کلی به مفهوم افزایش دمای ناحیه بخصوصی از بدن به اندازه 5 درجه بالاتر از دمای فیزیولوژیک بدن است. به طور کلی این افزایش حرارت برای از بین بردن تومورهای سرطانی همزمان با رادیوتراپی و شیمی درمانی استفاده می شود. به طوری که سلولهای سالم اطراف تومور دچار آسیب دیدگی نشوند. |
| ذینفعان نتایج طرح | بیماران- شرکت های دانش بنیان نانو فن آور |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| علی اصغر حمیدی | مجری اول (اصلی-هیات علمی) |
| امین امانی | همکار اصلی |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر نانوذرات پلیمری زیست تخریب پذیر و زیست سازگار بعنوان حامل داروها و مواد ژنتیکی در ژن درمانی و رهش کنترل شده کاربرد دارند.متن خبر اهمیت موضوع: ژن درمانی یکی از راههای درمان و ترمیم در نقصها و بیماریهای ژنتیکی است که نیاز به حامل کار آمد برای انتقال دارو و ژن به سلولهای آسیب دیده دارد. اهمیت این حاملها در انتقال هدفمند این مواد به درون سلول هدف می باشد. از مهمترین یافته های این طرح که از ناقلهای پلیمری زیست تخریب پذیر و زیست سازگار به عنوان حامل و از پلاسمیدهای بی خطر شده توسط مهندسی ژنتیک به عنوان ناقل DNA شده عبارتند از: محافظت از مواد ژنتیکی در برابر آسیبهای ناشی از هضم آنزیمی و امواج فراصوت، کاهش قابل توجه اثر سمی پلی اتیلن ایمین بر روی DNA و افزایش کارآیی انتقال مواد ژنتیکی. نتایج حاصل از آنالیز خروجی های فلوسایتومتری نشان می دهد که با افزایش نسبت پلی اتیلن ایمین به کو پلیمر، انتقال مواد ژنتیکی به سلولهای سرطانی شده سینه بهبود می یابد. متخصصین حوزه درمان بعنوان کاربران این نتایج میتوانند از نتایج این طرح در پروژه های تحقیقاتی خود استفاده کنند. یکی از قطعات این کوپلیمر پلی لاکتید اسید است که در محیط اسیدی سلولهای سرطانی میتواند محتوی دارویی و یا ژنی خود را در داخل سلولهای سرطانی آزاد کند. |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر نانوذرات پلیمری زیست تخریب پذیر و زیست سازگار بعنوان حامل داروها و مواد ژنتیکی در ژن درمانی و رهش کنترل شده کاربرد دارند.متن خبر اهمیت موضوع: ژن درمانی یکی از راههای درمان و ترمیم در نقصها و بیماریهای ژنتیکی است که نیاز به حامل کار آمد برای انتقال دارو و ژن به سلولهای آسیب دیده دارد. اهمیت این حاملها در انتقال هدفمند این مواد به درون سلول هدف می باشد. از مهمترین یافته ها در این کار تحقیقاتی که از پلی اتیلن ایمین و دی ان آ (PEI/DNA) و کوپلیمر زیست تخریب پذیر و زیست سازگار سه قطعه ای متشکل از پلی اتیلن گلیکول و پلی لاکتید اسید بنام PLA-PEG-PLA برای انتقال مواد ژنتیکی بداخل سلولهای سرطانی شده سینه (MCF-7 ) استفاده شد. نتایج این مطالعه نشان داد که کو پلیمر فوق در محافظت از pDNA در برابر آسیبهای ناشی از هضم آنزیمی و امواج فراصوت توانمند بوده و اثر سمی پلی اتیلن ایمین را بر روی DNA را به میزان 2.5 برابر کاهش می دهد. همچنین این نتایج نشان می دهند که توانایی این کوپلیمر در انتقال مواد ژنتیکی در مقایسه با کمپلکس PEI/DNA به میزان قابل توجهی بیشتر است.متخصصین حوزه درمان بعنوان کاربران این نتایج میتوانند از نتایج این در پروژه های تحقیقاتی خود جهت درمان بیماریها استفاده کنند. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
