مهندسی بافت عروق با استفاده از سلولهای اندوتلیال و پریست بر روی نانوداربست PCL-PU

مجریان: سودابه داوران , رضا رهبرقاضی

خلاصه روش اجرا: رگ زایی و القاء ان به دنبال بسیاری از انواع بیماریها و مشکلات ایسکمیک لازم و ضروری به نظر می رسد. در این مطالعه هدف بر ساخت داربست نانوفیبری PCL-PU جهت کشت دو رده سلولی دیواره عروقی شامل سلول¬های آندوتلیال و پریسیت ها می باشد. برای تهیه نانوداربست پلیمری زیست سازگار PCL-PU به وسیله الکتروریسی حلال های DMF: THF (1:1) به نسبت برابر باهم مخلوط میشوند سپس 1.2 گرم پودر PCL و PU به نسبت برابر مخلوط میشود تا 10 گرم مخلوط پودر پلیمر و حلال بدست بیاید. مخلوط به مدت 6 ساعت همزده میشود تا محلول هموژنی حاصل شود. سپس الکتروریسی انجام خواد شد و غشاهای PCL-PU از فویل الومینومی جدا میشود. و از نظر مورفولوژی و پروسیتی به وسیله میکروسکوپ SEM و قدرت مکانیکی مشخصه یابی خواهند شد. سلولهای اندوتلیال HUVECs در محیط کشت نرمال شاملDMEM حاویVEGF 10%, FBS، 100 IU ml–1 penicillin و 100 mg ml–1 streptomycinکشت می یابند. 15 mm از نانوفیبرهای تهیه شده در پلیت های 24-well قرار داده میشوند. HUVECs ها با trypan blue assay و با بکارگیری یک hemocytometer شمارش میشوند. سپس روی اسکافلدها با دانسیته 2000 سلول در هر ول seed می گردند. زنده مانی و میزان تکثیر سلولها بر روی اسکافلدها در روز سوم (پس از 72 ساعت) با بکارگیریMTT assay سنجیده میشود. سلولهای بنیادی مزانشیمال نیز در محیط کشت نرمال شاملDMEMحاوی, 10% FBS,، 100 IU ml–1 penicillin و 100 mg ml–1 streptomycinکشت می یابند. 15 mm از نانوفیبرهای تهیه شده در پلیت های 24-well قرار داده میشوند. MSCها با trypan blue assay و با بکارگیری یک hemocytometer شمارش میشوند. سپس روی اسکافلدها با دانسیته 2000 سلول در هر ول seed می گردند. زنده مانی و میزان تکثیر سلولها بر روی اسکافلدها در روز سوم (پس از 72 ساعت) با بکارگیریMTT assay سنجیده میشود. ارزیابی بیان فاکتور‌های VE-cadherin و 𝛂-SMA در داربست های کشت شده با سلول‌های AF-MSCپس از گذشت 14 روز از کشت سلولی، که از نظر دریافت فاکتور رشد اندوتلیال و یا فاکتور رشد پریسیت مثبت و یا منفی بودند، در مقایسه با گروه‌های کنترل مثبت و یا منفی با تست ایمونوهیستوشیمی ارزیابی خواهد شد. و تغییرات احتمالی بیان پروتئین‌های Von-willebrand و PDGFR-β پس 14 روز از کشت سلول‌های AF-MSCs در بستر پلیت با و بدون دریافت محیط تمایز، با استفاده از روش وسترن بلات بررسی ارزیابی خواد شد. بررسی اتصال سلول به سلول به وسیله SEM انجام خواهد شد.