ارزش فلوسیتومتری (HLA-DR CD14,CD13, ، CD25, CD64 ) در تشخیص پیش آگهی بیماران سپتیک بستری در بخش مراقبت های ویژه
Value of flowcytometry(HLA-DR, CD14,CD25,CD13, CD64) in prediction of prognosis in critically ill septic patients admitted to ICU.
مجریان: عطا محمودپور
خلاصه روش اجرا: از تمام بیماران بستری با تشخیص سپسیس نمونه خون در 24 ساعت اول اخذ خواهد شدوبا رعایت زنجیره سرما وcoolbox به آزمایشگاه بیمارستان قاضی منتقل خواهد شد. سپس نمونه ها در یخچال 20- حفظ شده و هر 72 ساعت نمونه ها ارزیابی خواهند شد. (کیت های (CD 14, CD25, CD64, CD13, HLA-DR. همچنین برای ارزیابی وضعیت نرمال و مقایسه آن با وضعیت بیماران سپتیک 20 نمونه افراد سالم نیز به عنوان کنترل جهت فلوسیتومتری اخذ خواهد شد.چهت انچام آنالیز فلوسیتومتری شمارش سلولی به گونه ای تنظیم خواهد شد که 105× 2سلول در صد میکرولیتر سوسپانسیون وجود داشته باشد. سلول ها جمع آوری و در لوله های فلوسایتو متری ریخته خواهد شد.لوله ها سانتریفوژخواهنی شد وبا PBSمورد شستشو قرار خواهند گرفت. به لوله ها آنتی بادی مربوطه به میزان 2 میکرو لیتر اشافه و به مدت 45 دقیقه انکوبه خواهد شد. در کنار هر لوله تست ایزوتیپ کنترل هم به منظور تنظیم دستگاه حذف سیگنال های زمینه اضافی و واکنشهای غیر اختصاصی نیز گذاشته خواهد شد.بعد از گذشت زمان لازم سلول ها یک بار با PBS حاوی نیم درصد BSAشستشو داده خواهند شد تا انتی بادی هایی که نچسبیده بودند سشته شده و از لوله خارج شوند. در نهایت روی ان 250 میکرو لیتر از PBSو 250 میکرولیتر از پارافرمالدیید 1% خواهیم ریخت تا به حالت سوسپانسیون در ایند.در نهایت با فلوسیتومتر FACSCaliburو نرم افزار Procellaquest داده ها دریافت و توسط نرم افزار Flowing مورد تجزیه و تحلیل قرار خواهند گرفت. برای تمام بیماران اطلاعات زیر ثبت خواهد شد: APACHE، SOFA، طول مدت بستری در ICU، طول مدت تهویه مکانیکی، مورتالیته، طول مدت بستری در بیمارستان، علت پذیرش (تروما، جراحی، مدیکال)، محل عفونت بیمار، طول مدت درمان با وازوپرسور، انجام دیالیز.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 59291 |
| عنوان فارسی طرح | ارزش فلوسیتومتری (HLA-DR CD14,CD13, ، CD25, CD64 ) در تشخیص پیش آگهی بیماران سپتیک بستری در بخش مراقبت های ویژه |
| عنوان لاتین طرح | Value of flowcytometry(HLA-DR, CD14,CD25,CD13, CD64) in prediction of prognosis in critically ill septic patients admitted to ICU. |
| نوع طرح | طرح تحقیقاتی |
| اولویت طرح | --- غیر اولویت دار (جزو اولویت های دانشگاه نمی باشد) |
| نوع مطالعه | بررسی مقطعی ( Cross Sectional) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | خير |
| مقطع پایان نامه | دکتری فوق تخصصی بالینی |
| مدت اجرا - ماه | 15 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | سندرم سپسیس یک معظل بزرگ بهداشتی ودرمانی در سراسر دنیا می باشد که با مورتالیته حدود 20 تا 50 درصد همراه می باشد (1) مطالعات جدید حاکی از آن است که مرگ ناشی از سپسیس ، در اثر اثرات مکانیسم های مشخص در طی زمان می باشد . در مراحل ابتدایی بیماری آبشاری از مدیاتورهای التهابی ایجاد می شود که مسئول هیپوپرفیوژن ونارسایی ارگان ها می باشد (2) سپس بدن برای مقابله با این اتهاب مکانیسم های جبرانی را فعال می کند که در مراحل ابتدایی اثرات محافظتی دارند ولی سرانجام در طی زمان ممکن است منجر به ساپرس ایمنی شوند (2) امروزه درمانهای محرک ایمنی به عنوان استراتژی جدید در ردمان بیماران سپتیک معرفی شده اند . اولین قدم بحرانی ، شناسایی بیمارانی می باشد که از درمانها سود خواهند برد . درحقیقت در صورت عدم وجود علائم بالینی اختصاصی برای پاسخ ایمنی ، تعیین بهترین درمان کمکی بیولوژیکی برای بیماران بر اساس وضعیت ایمنی آنها مشکل خواهد بود . و این باید شامل درمان صحیح (تحریک ایمنی / تعدیل ایمنی ، بلوک کردن آپوپ توزیس ) در زمان صحیح ( درمان اولیه وسریع در مقابل تاخیری ) و در بیمار مناسب باشد ( 3) . بنابراین فلوسیتومتری می تواند یک اقدام مناسب در درمان هر مرحله از بیماران سپتیک شامل تشخیص عفو نت برای هدفمندی درمان وکنترل تاثیر درمان استفاده شود .جدیدا نشان داده شده است که CD64 یک مارکر اختصاصی وحساس برای عفونت سیستمیک و سپسیس می باشد (4) . بیان CD64 نوتروفیل تعدیل می شود همراه با شدت پاسخ ااتهابی به یک اسیب بافتی یا پروسه التهابی مشخص ( 5) . در حقیقت CD64 نوتروفیل یکی از تغییرات انتی ژنتیکی ایجاد شده توسط نوتروفیل ها در حین پاسخ حاد التهابی می باشد . در شرایط نرمال بیان CD64 نوتروفیل ها تقریبا جزئی می باشد از طرف دیگر بیان CD64 دمای اتاق برای مدت > ´ 30 پایدار می باشد ( بزخلاف سایر مارکرها ) بنابراین CD64 نوتروفیل ها به عنوان یک مارکر حامل و اختصاصی برای عفونت سیستمیک و سپسیس در بزرگسالان وکودکان مطرح می باشد (8-6) .امروزه نیاز به مطالعات بیشتر جهت تایید این تست وجود دارد وهمچنین نیاز به تعیین نقش CD64 در افتراق عفونت های باکتریال وویروسی می باشد. (9) مونوسیت های بیماران سپتیک به طور مشخصی کاهش توانایی مقابله با وضعیت التهابی را دارند . این مونوسیت ها قویا در سطح خود HLADR را بیان می کنند به راحتی توسط فلوسیتومتری قابل شناسایی می باشد . مونوسیت های با کاهش بیان HLADR یا نبود آن ، در بیان عملکرد آنتی ژنی خود ودر توانایی برای ایجاد مدیاتورهای التهابی در پاسخ به تحریک مهار شدند (10،11) در بیماران سپتیک کاهش HLA-DR در مونوسیت ها نشان داده شده ومطالعات نشان داده اند که کاهش بیان HLA-DR در مونوسیت ها یک مارکر برای ایجاد ضعف وساپرس ایمنی در بیماران بد حال می باشد(2) همچنین می تواند بیانگر ایجاد عفونت بیمارستانی وایجاد عارضه سپسیس باشد (2،12،13) با توجه به اینکه HLA-DR مارکری است که سریعا تعدیل می شود بنابراین دمای نگهداری وتاخیر قبل از رنگ امیزی بسیار مهم است . استفاده از EDTA ویخ قبل از رنگ آمیزی وطی 4 ساعت بعد از نمونه گیری جهت انجام صحیح آزمایش لازم می باشد (10) . اختلال عملکرد لنفوشیت های T بعد از سپسیس شامل ایجاد یک وضعیت آلرژی با کاهش تکسیر به تحریک میتوژنیک ، یک شیفت به سمت پروفایل Th2 ترشح سیتوکین ، افزایش آپوپتوزیس وافزایش درصد لنفوسیت های تنظیم کننده CD25₊CD4₊(tneg) می باشد (14،15) . جدیدا یک رابطه قوی بین افزایش نسبت Treg/effector درخون کامل بیماران با شوک سپتیک وکاهش پاسخ پرولیفراتیو لنفوسیت های بیماران بعد از تحریک میتوژنیک نشان داده شده است .(16) Andreu-Ballester وهمکاران در مطالعه ای نشان دادند که در طی سپسیس سلولهای T cell بیشترین کاهش را نشان می دهند واین کاهش بیشتر در بیماران شدید می باشد . وهمچنین نشان دادند که کاهش در Tcell با افزایش معنی داری در مورتالیته همراه می باشد (IV) Arneth B.M در مطالعه ای نشان دادند که میزان کلی گرانولوسیت های نابالغ وشمارش High flurescence lymphocyte cell(HFLC) یک اندکس خوب برای تشخیص بیماران سپتیک از غیر سپتیک می باشد. (18) Coberly J وهمکاران در مطالعه ای نشان دادند که نوتروفیل CD64 اندازه گیری شده توسط فلوسیتومتری دارای ارزش پیشگویی کننده منفی بسیار بالایی برای رد کردن سپسیس می باشد (19). در مطالعه دیگر که به ارزیابی بیان زود رس HCADR ومارکرهای میلوئید CD64 در خون بیماران با شوک سپتیک پرداخت نشان داد که میزان مرگ ومیر با CD64 ارتباط معنی داری دارد ولی بیان HLADR پیشگویی کننده مطمئنی جهت مرگ بیماران سپتیک می باشد(20) . براین اساس ایمونوتراپی می تواند بر اساس پاسخ بیومارکرهای فلوسیتومتری انجام شود . مطالعات فاز دو نشان داده اند که IL-7 به طور مشخصی سبب ↑Tcell CD4₊ ، CD8₊ می شود و IL-7 نو ترکیبی می تواند در درمان بیماران سپتیک نیز مورد نظر قرار گیرد ولی هنوز نیازمند مطالعات بیشتر با حجم نمومنه بالاتری می باشیم . مطالعات در سپسیس نشان دادند که فقط CD64 بنظر می رسد که این توان را داشته باشد تا بهمراه CRP و سیتوکین های IL6 یا IL8 سبب افزایش حساسیت تشخیص تا 100 درصد شود (22،23) . ولی هنوز هم مطالعات زیادی در این زمینه مورد نیاز می باشد . با توجه به مطالب ذکر شده بر آن شدیم تا ارزش فلوسیتومتری را در پیشگویی پیش آگهی بیماران سپتیکبستری در بخش مراقبت های ویژه بررسی نماییم . |
| اهداف اختصاصی |
ارزش فلوسیتومتری (HLA-DR وCD13 و CD14 ، CD64 ، CD25) در ارزیابی مدت بستری در ICU بیماران سپتیک بستری در بخش مراقبت های ویژه -. ارزش فلوسیتومتری (HLA-DR وCD13 و CD14 ، CD64 ، CD25 ) در ارزیابی نارسایی ارگان بیماران سپتیک بستری در بخش مراقبت های ویژه |
| چکیده انگلیسی طرح | Value of flowcytometry(HLA-DR, CD14,CD25,CD13, CD64) in prediction of prognosis in critically ill septic patients admitted to ICU. |
| کلمات کلیدی | سپسیس / سپتیک شوک : سپسیس یک نارسایی ارگان تهدید کننده حیات می باشد که ناشی از پاسخ ایمنی تنظیم نشده میزبان نسبت به عفونت می باشد . سپتیک شوک زیر مجموعه ای از سپسیس می باشد که اختلالات سیرکولاتوامپدافن ری سلولی ومتابولیک در ان منجر به افزایش مورتالیته می شود . در این بیماری بیماران جهت حفظ فشاز متوسط شریانی بالای 65 نیازمند وازوپرسور می باشند . Sepsis3)) فلوسیتومتری : فلوسیتومتری یک تکنیک بیو فیزیکی بر پایه لیزر یا امپدافن می باشد که در شمارش سلولی ، تقسیم بندی سلولی ، ارزیابی بیومارکرها ومهندسی پروتئین که با استفاده از تعلیق سلول ها در جریان مایع وعبور دادن آنها از طریق تشخیص الکترونیکی به کار برده می شود . |
| ذینفعان نتایج طرح | بیماران بد حال بستری در icu |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| عطا محمودپور | مجری اول (اصلی-هیات علمی) |
| علی اکبر موثق پور اکبری | همکار اصلی |
| کامران شادور | همکار اصلی |
| هادی همیشه کار | همکار اصلی |
| حسن سلیمانپور | همکار اصلی |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر کمک به تشخیص و درمان سریع بیماران سپسیس باعث بهبود پیش آگهی شده و همچنین توصیه به استفاده و پایش ژن های خود بیمارانمتن خبر بیماران سپسیس یک معضل بهداشتی درمانی با مرگ و میر بالا می باشد که با وجود پیشرفت های فراوان همچنان درمان استانداردی برای آن وجود ندارد .امروزه جهت کمک به تشخیص و درمان سریع این بیماران که باعث بهبود پیش آگهی آن ها می شود توصیه به استفاده و پایش ژن های خود بیماران می شود به این ترتیب می توان هم به تشخیص زودتر بیماری رسید و هم درمان مناسب برحسب شرایط هر فرد برای وی طراحی نمود . |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر استفاده از بیان ژن ها در میکرو RNA جهت تشخیص و درمان بیماران سپتیک می تواند گام مهمی در جهت کاهش موربیدیته و مورتالیته براساس درمان تشخیصی (Individualized medicine ) این بیماران باشدمتن خبر استفاده از بیان ژن ها در میکرو RNA جهت تشخیص و درمان بیماران سپتیک می تواند گام مهمی در جهت کاهش موربیدیته و مورتالیته براساس درمان تشخیصی (Individualized medicine ) این بیماران باشد . البته این امر به مطالعات بیشتری در آینده نیاز دارد .
استفاده از بیان ژن ها در میکرو RNA جهت تشخیص و درمان بیماران سپتیک می تواند گام مهمی در جهت کاهش موربیدیته و مورتالیته براساس درمان تشخیصی (Individualized medicine ) این بیماران باشد . البته این امر به مطالعات بیشتری در آینده نیاز دارد . |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر اهمیت سپسیس و مرگ و میر بالای آن توسعه روش های تشخیصی و درمانی مناسب جهت این بیماران و آگاهی عموم جامعه با بیماری سپسیس از طریق اطلاع رسانی در وسایل ارتباط جمعی و شبکه های اجتماعی و اطلاع رسانی جهت پیشگیری از سپسیس و آشنایی با اهمیت آنمتن خبر با توجه به اهمیت سپسیس و مرگ و میر بالای آن توسعه روش های تشخیصی و درمانی مناسب جهت این بیماران و آگاهی عموم جامعه با بیماری سپسیس از طریق اطلاع رسانی در وسایل ارتباط جمعی و شبکه های اجتماعی و اطلاع رسانی جهت پیشگیری از سپسیس و آشنایی با اهمیت آن |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر طراحی و ساخت کیت های تشخیصی و درمانی سپسیس و فراهم نمودن بستر مناسب جهت بررسی ژنتیک بیماران سپسیس و درمان براساسpersonalized medicine درجهت بهبود پیش آگهی بیمارانمتن خبر طراحی و ساخت کیت های تشخیصی و درمانی سپسیس و فراهم نمودن بستر مناسب جهت بررسی ژنتیک بیماران سپسیس و درمان براساسpersonalized medicine درجهت بهبود پیش آگهی بیماران |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
