مطالعه اثر هیستوپاتولوژی و بیوشیمیایی اکتینومیست های کشته شده بر بیماری دیابت نوع 1 در موش صحرایی ویستار
Histopathological and biochemical effects of killed Actinomycetes on diabetes mellitus type 1 in Wistar rat
مجریان: مهران مسگری عباسی , منیره خردادمهر
خلاصه روش اجرا: حیوانات آزمایشگاهی: برای اجرای این پایان نامه 36 سر رت نر نژاد ویستار در محدودهی سنی 6-5 ماه با وزن 250< گرم از مرکز پرورش حیوانات دانشگاه علوم پزشکی تبریز تهیه میشود. تمام حیوانات تحت رژیم پایه (pellate [5% کل انرژی از چربی، 53% از کربوهیدرات و 23% از پروتئین])، شرایط کنترل شدهی دما و رطوبت، نور (سیکل تاریکی/روشنایی 12ساعته) در قفسهای 3 تایی قرار میگیرند و همهی قوانین اخلاقی مربوط به نگهداری و کار با این حیوانات رعایت خواهد شد. سپس به طور تصادفی به 4 گروه 9 تایی تقسیم میشوند. ایجاد دیابت نوع 1: جهت القای دیابت نوع 1 از تزریق داخل صفاقی 60 میلی گرم به ازای کیلوگرم وزن بدن داروی استرپتوزوتوسین به صورت تک دوز در 5 گروه آزمایش استفاده میشود. گروه ششم به عنوان گروه کنترل منفی، آب مقطر استریل تزریق خواهد شد. سه روز پس از تزریق دارو جهت تشخیص دیابت میزان قند خون ناشتا با خونگیری از حیوان انجام خواهد شد و رتهای با قند خون بالای 11 میلی مول بر لیتر به عنوان دیابتی انتخاب و وارد مطالعه میشوند (Anandh- Babu et al., 2006). چالش با باکتری کشته: به هر موش در گروه های 9 تایی به صورت خوراکی غلظت های مختلف باکتری (تسوکومورلا اینکونینسیس یا گوردونیا برونشیالیس) (طبق روش تارس و همکاران 2012 با تغییرات جزئی) به شرح زیر به مدت دو هفته با گاواژ خورانده می شود (Nofouzi et al., 2016). گروه های کنترل منفی و دیابت نیز به همان میزان نرمال سالین دریافت می کنند. 1) گروه کنترل منفی (بدون ایجاد دیابت) : بدون تجویز باکتری، دریافت نرمال سالین 2) گروه کنترل مثبت دیابت: بدون تجویز باکتری، دریافت نرمال سالین 3) گروه آزمایش با تجویز 105 باکتری 4) گروه آزمایش با تجویز 107 باکتری خونگیری و ارزیابی فاکتورهای بیوشیمیایی: به منظور ارزیابی اثر باکتری مورد نظر، در فواصل زمانی معینی (روزهای 0، 7،14،21و 28) پس از وزن کشی موش ها، از 5 موش از هر گروه خونگیری انجام داده و بعد از جداسازی سرم، فاکتورهای مهم در دیابت شامل گلوکز، کلسترول، تری گلیسیرید، اوره، کراتینین، آلبومین، پروتئین تام و آنزیم های ALT، AST و CK و همچنین توتال آنتی اکسیدان و لیپیدپراکسیداسیون اندازه گیری خواهند شد و مورد مطالعه قرار خواهند گرفت. نمونه برداری و مطالعات هیستوپاتولوژی: در پایان مطالعه، از هر گروه پنج موش با رعایت حقوق حیوانات آزمایشگاهی، یوتنایز شده و از بافت های کبد، کلیه، قلب و پانکراس آنها نمونه برداری خواهد شد. نمونه های مورد نظر با فرمالین 10% فیکس شده و بعد از پاساژ بافت ها، به روش روتین و تهیه بلوک های پارافینی، مقاطعی به ضخامت 5 میکرون تهیه و بعد از انجام رنگ آمیزی هماتوکسیلین- ائوزین، به منظور بررسی بهبود احتمالی ساختار بافت های مذکور به ویژه پانکراس بعد از چالش با باکتری کشته، با میکروسکوپ نوری مورد مطالعه قرار خواهند گرفت.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا در دانشکده/مرکز |
| کد طرح | 58759 |
| عنوان فارسی طرح | مطالعه اثر هیستوپاتولوژی و بیوشیمیایی اکتینومیست های کشته شده بر بیماری دیابت نوع 1 در موش صحرایی ویستار |
| عنوان لاتین طرح | Histopathological and biochemical effects of killed Actinomycetes on diabetes mellitus type 1 in Wistar rat |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | دیابت |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | خیر |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | دکتری عمومی |
| مدت اجرا - ماه | 12 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | دیابت یک اختلال در سوخت و ساز (متابولیسم) بدن است که در آن یا انسولین در بدن وجود ندارد و یا انسولین موجود قادر نیست وظیفه خود را به درستی انجام دهد و در نتیجه به علت وجود مقاومت در برابر آن، قند خون بالا میرود. بالا بودن قند خون در دراز مدت باعث بروز عوارض در سیستم قلب و عروق، کلیه ها، کبد، چشم و اعصاب می شود. آمار نشان می دهد که دیابت یکی از علل عمده مرگ و میر و ناتوانی در آینده ای نزدیک در جوامع بشری است (Papadopoules et al., 2007). مشاهدات اخیر بیانگر وجود اختلالات روده ای همراه با دیابت خود ایمنی در هر دو مدل آزمایشی جوندگان و بیماران می باشد که نقش بالقوه روده در پاتوژنز دیابت نوع 1را نشان می دهد. مطالعه وضعیت التهابی مخاط روده و ارتباط آن با میکروبیوت های روده در دیابت نوع 1 برای درک بهتر مشخصات بیماری می تواند موثر واقع شود. از جمله عواملی که ممکن است سد روده ای را تغییر دهد و بر فعالیت ایمنی آن تأثیر بگذارد، میکروبیوت های روده هستند که در حال حاضر در این مورد مظنون اصلی می باشند. در مطالعات پیشین نشان داده شده است که به هم خوردن تعادل میکروبیوت های روده با فعال شدن سیستم ایمنی بدن مرتبط می باشد که می تواند باعث پاسخ های ایمنی نابجا و متعاقب آن سبب التهاب در روده و ارگان های دیگر شود. تغییر میکروویلی، نشت از اتصالات محکم بین سلولی، افزایش بیان ژن های مرتبط با آنتی ژن _ آنتی ژن D لوکوسیت انسانی و بخشی از آنتی ژن DP لوکوسیت انسانی و مولکول 1 چسبنده بین سلولی در اپیتلیوم ویلی ها و کریپتها، نشان می دهد که احتمالا ارائه آنتی ژن توسط سلول های اپیتلیال کوچک روده افزایش می یابد. مخاط دوازدهه در دیابت نوع یک، نشانه های خاص التهاب و ترکیب خاص میکروبیومی را نشان می دهد. آثار التهاب مزمن و ترکیب خاص میکروبی در مخاط دوازدهه بیماران مبتلا به دیابت نوع 1 مشاهده شده است. به نظر می رسد که بین وضعیت التهابی دوازدهه و دیابت نوع 1پیوند قوی وجود دارد. تغییرات مورفولوژی و عملکردی دوازدهه در بیماری های پانکراس مثل پانکراتیت نیز مورد بررسی قرار گرفته است. ( 2017 Silvia Pellegrini, وهمکاران). به هم خوردن تعادل و تغییر ترکیب میکروبیوتای روده به دلیل افزایش نفوذ پذیری روده و نفوذ التهاب باعث تحریک سیستم ایمنی علیه سلول های بتا در افراد مبتلا می شود(2016Bibbò S, و همکاران) مطالعات نشان داده اند بین سیستم ایمنی بدن و میکروبیوت روده ارتباط وجود دارد که بلافاصله پس از تولد شروع به برقراری ارتباط با یکدیگر می کنند. یک عملکرد عمده سیستم ایمنی روده میزبان جلوگیری از پاسخ های التهابی و حفظ بقای باکتری های مفید و همزمان مبارزه با پاتوژن های بالقوه است . شواهد اخیر نشان داده است که میکروبیوم روده در پاتوژنز دیابت نوع 1 در مدل موش دخالت دارد. در موش هایی که در آنها دیابت نوع 1 ایجاد شده بود، سطح Bacteroides در مقایسه با موش هایی غیر دیابتی و موش های دیابتی بهبود یافته با آنتی بیوتیک تراپی کاهش یافته بود. (2016James C ,) روده دارای حدود 1014 میکروارگانیسم با بیش از 500 گونه مختلف است که فراوانی باکتریایی در بخش های پایین تر دستگاه گوارش افزایش می یابد. تعداد این باکتری ها بین افراد مختلف متفاوت است، اما فیرمیکوت ها و باکتروئید ها, پروتوباکتریا ها و اکتینو باکتریا ها بیشترین میزان را دارند.( 2016James C ,). در چندین مطالعه به تفاوت قابل توجهی در ترکیب میکروفلور مدفوع افراد مبتلا به دیابت خود ایمنی اشاره شده است تعداد باکتری های اکتینوباکتر (که اکتینومیست ها نیز در این شاخه قرار دارند)، فیرمیکوتها، باکتری های تولید کننده بوتیرات (عمدتا کلستردیاها) و میزان Bacteroides Firmicutes / درمدفوع بیماران مبتلا به دیابت نوع 1 در مقایسه با افراد سالم به طور قابل توجهی کاهش می یابد. در سال های اخیر، مطالعات ارزشمندی به طور مستقیم بر روی روده کوچک به جای مطالعات در مورد نمونه مدفوع انجام شده است. در واقع، به دلیل رابطه عملکردی و جایگاه نزدیک آنها و منبع تغذیه خونی مشترک، بررسی ارتباط دوازدهه و پانکراس منطقی تر به نظر می رسد. در موش صحرایی گزارش شده است که گونه های مختلف باکتری موجود در دوازدهه انسانی، اگر به سیستم مجرای پانکراس تزریق شود، خیلی سریع باعث نفوذ سلول های آماسی عمدتا شامل نوتروفیل های چند هسته ای, مونوسیت ها و ماکروفاژها می شود که این سلول ها می توانند سبب نابودی سلول های بتا شوند. ( 2017 Silvia Pellegrini, وهمکاران). در سال های اخیر، میکروبیوت های روده به عنوان یکی از عوامل اصلی در پاتوژنز دیابت نوع 1 مطرح شده و تغییرات مختلفی در ترکیبات میکروبی روده مدل حیوانی و انسان توصیف شده است. همچنین در حال حاضر خانواده( Bifidobacterium (Phylum Actinobacteria معمولا به عنوان پروبیوتیک استفاده می شود.( Gillian M.2015 وهمکاران ) در میان باکتری های مشابه مایکوباکتریوم ها از راسته اکتینومیسال (Actinomycetales) باکتری های اکتینومیست را می توان نام برد که وابستگی نزدیکی به مایکوباکتریوم ها دارند. این باکتری ها وقتی به صورت سوسپانسیون باکتری کشته شده استفاده می شوند فعالیت ادجوانتی و محرک ایمنی دارند(Tarres و همکاران، 2012). تعدادی افراد داوطلب به صورت خوراکی با باکتری کشته شده اکتینومیست درمان شده اند و بروز سرماخوردگی در این دسته کمتر بوده است. همچنین در بیماران با زخم های هرپس سیمپلکس ویروسی استفاده از باکتری کشته شده اکتینومیست باعث کوتاه شدن دوره، کاهش شدت و کاهش عود مجدد زخم ها می شود. در دامپزشکی اکتینومیست در درمان sweet-itch که آلرژی پوستی فصلی در اسب می باشد، استفاده می شود. برای این بیماری درمان موثر دیگری وجود ندارد. این باکتری در درمان بیماری یلپییک که بیماری انسداد مجاری هوایی آلرژیک در اسب می باشد نیز کاربرد دارد (Stanford و Stanford.، 2012). با توجه به مطالب فوق الذکر طرح حاضر طراحی و مورد اجرا قرار می گیرد |
| اهداف اختصاصی | <p><strong><span dir="RTL" lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span style="font-family:"B Nazanin"">مطالعه بیوشیمیایی اثر باکتری کشته شده <em>تسوکامورلا اینکونینسیس</em> بر بیماری دیابت نوع 1 در موش صحرایی ویستار</span></span></strong></p>-<p dir="RTL" style="text-align:center"><strong><span style="font-family:"B Nazanin"">مطالعه هیستوپاتولوژی اثر باکتری کشته شده <em>تسوکامورلا اینکونینسیس</em> بر بیماری دیابت نوع 1 در موش صحرایی ویستار</span></strong></p> |
| چکیده انگلیسی طرح | Laboratory animals: For the implementation of this thesis, 36 male Wistar rats in the age range of 5-6 months and weighing <250 grams will be obtained from the Animal Breeding Center of Tabriz University of Medical Sciences. All animals will be placed in cages of 3 under basal diet (pellate [5% total energy from fat, 53% from carbohydrate, and 23% from protein]), controlled conditions of temperature and humidity, light (12-hour light/dark cycle), and all ethical rules related to the maintenance and work with these animals will be observed. |
| کلمات کلیدی | ALT: Alanine Aminotransferase AST: Aspartate Aminotransferase CK: Creatinin kinase |
| ذینفعان نتایج طرح |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| مهران مسگری عباسی | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| منیره خردادمهر | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| صبری قادری | دانشجوی مالک پایان نامه |
| فاطمه اسکندری | همکار اصلی |
| سهیلا فتوحی | همکار اصلی |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر مصرف خوراکی گونه ای از باکتریها به نام تسوکومورلا اینکونینسیس بصورت کشته شده با گرما در موشهای صحرایی دیابتی موجب بهبود پارامترهای بیوشیمیایی و بافت شناسی می شودمتن خبر دیابت نوع 1 در سالهای اخیر به ویژه در جوانان افزایش یافته و کیفیت زندگی بیماران درگیر را محدود کرده است. بنابراین، بسیاری از محققان مطالعات گسترده ای را برای یافتن درمانهای جایگزین انجام داده اند. مطالعه اثرات ضد دیابتی خوراکی گونه ای از باکتریها به نام تسوکومورلا اینکونینسیس بصورت کشته شده با گرما در موشهای صحرایی دیابتی نشان دهنده تاثیر مثبت آن بر حفظ عملکرد کلیوی- کبدی و پانکراس و بهبود پارامترهای بیوشیمیایی و پاتولوژیک بود. |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر تجویز خوراکی اکتینومایست کشته شده با گرما از گونه تسوکومورلا اینکونینسیس در موشهای صحرایی دیابتی موجب بهبود پارامترهای بیوشیمیایی و پاتولوژیک می شودمتن خبر دیابت نوع 1 به عنوان یک بیماری غدد درون ریز دژنراتیو، در سالهای اخیر به ویژه در جوانان افزایش یافته و کیفیت زندگی بیماران درگیر را محدود کرده است. نتایج مطالعه حاضر نشان دهنده بهبود نتایج هیستوپاتولوژیک و بیوشیمیایی در رتهای مبتلا به دیابت نوع 1 ناشی از استرپتوزوتوسین پس از تجویز خوراکی اکتینومیست کشته شده با گرما از گونه تسوکومورلا اینکونینسیس بود. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
