ارزیابی مارکرهای عملکردی کبدی در شیت سلولهای کبدی تولید شده با پلیمر حساس دمایی در مقایسه با شیت تولید شده در ماتریکس سلول زدایی شده کبدی
Assessment of functional markers of liver in hepatocytes sheet that produced by a temperature responsive polymer compared with the sheet that produced by decellolarized matrix
مجریان: عفت علیزاده , نصرت اله ضرغامی
خلاصه روش اجرا: در ابتدا نمونه های بافت چربی زیر پوستی در جراحی از افراد اهدا کننده اخذ خواهد شد سپس سلولهای بنیادی مزانشیمی به کمک پروتکل های مناسب از این بافت استخراج می گردند وبه کمک فلوسیتومتری وبه لحاظ مورفولوژی مورد ارزیابی قرار می گیرند سپس این سلولها در محیط DMEM, FBS, growth factors وآنتی بیوتیک کشت داده شده و تمایز به هپاتوسیتها به کمک فاکتورهای رشد اختصاصی انجام میگیرد. تمایز سلولهای بنیادی به هپاتوسیت ها با بیان ژنهای اختصاصی کبد مثل آلبومین ،آلانین ترانس آمینازوآلفا-فیتوپروتئین با QRT-PCR مورد بررسی قرار می گیرد. در مرحله بعد کوپلیمرهای حساس به دمای زیست سازگار و زیست تخریب پذیر بر پایه NIPAAm با روشهای مرسوم پلیمریزاسیون رادیکالی آزاد و حلقه گشا سنتز خواهد شد. سپس پلیمرها بوسیله دیالیز خالص سازی شده ومونومرهای واکنش نداده و کاتالیزورها و آغازگرها حذف خواهد شد. ساختار شیمیایی کوپلیمرهای سنتزی با NMR و FTIR بررسی خواهد شد. خاصیت حساسیت دمایی و تورمی پلیمرها مورد بررسی قرار خواهد گرفت.بعد از آماده شدن کو پلیمر جهت کشت دادن سلولهاابتدا کوپلیمرها را به مدت 2 ساعت با گاز اتیلن اکساید استریل کرده و سپس چند بار با PBS شسته در دمای محیط درمحیط کشت حل نموده و به فلاسک کشت سلولی تزریق خواهد شد. سپس فلاسک به انکوباتورc° 37 منتقل خواهدشد.بعد از 24 ساعت سلولها به فلاسک منتقل شده جهت رهش بافت سلولی از پلیمر فلاسک حاوی شیت پلیمری و بافت سلولی از انکوباتور خارج شده و در داخل ظرفی با دمای 4درجه سانتیگراد به مدت 5 دقیقه قرار می دهیم تا شیت پلیمری که حل شده از ظرف با پیپت خارج کنیم. بخش دوم این طرح سلول زدایی بافت کبدی می باشد که مطابق پروتکل مربوطه با استفاده ازdH2O ،دترجنت وPBS ویکی از لوپ های کبدانجام می گیردو سپس لود اسکفلد حاصل از سلول زدایی با سلولهای تمایز یافته وتمایز نیافته انجام خواهدگرفت.جهت بررسی حفظ ترکیب ECM وعاری شدن از سلول DNA quantification ، Scanning Electron Microscopy (SEM) انجام می گیرد.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 58680 |
| عنوان فارسی طرح | ارزیابی مارکرهای عملکردی کبدی در شیت سلولهای کبدی تولید شده با پلیمر حساس دمایی در مقایسه با شیت تولید شده در ماتریکس سلول زدایی شده کبدی |
| عنوان لاتین طرح | Assessment of functional markers of liver in hepatocytes sheet that produced by a temperature responsive polymer compared with the sheet that produced by decellolarized matrix |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | سلولهای بنیادی، مهندسی بافت و پزشکی بازساختی |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | دکتری تخصصی PhD |
| مدت اجرا - ماه | 24 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | ضرورت اجرای طرح توسعه طب بازساختی ( (Regenerative medicine )و تحقیقات سلول های بنیادی می باشد نوآوری این طرح مقایسه مارکرهای عملکردی کبدی در شیت سلولی و ماتریکس سلول زدایی شده می باشد |
| اهداف اختصاصی | <p> </p> <p dir="RTL"><strong><span style="font-size:12.0pt"><span style="font-family:Koodak"><span style="color:black">1)</span></span></span></strong><span style="font-size:12.0pt"><span style="font-family:Koodak"><span style="color:black"> طراحی وساخت شیت سلولی</span></span></span></p> <p> <p dir="RTL"> </p> </p>-<p><span dir="RTL" lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span style="font-family:"B Nazanin""><span style="color:black">مقایسه مارکرهای عملکردی بافت کبدی در دوروش شیت سلولی و بافت کبدی سلول زدایی شده </span></span></span></p>-<p><span style="font-family:Times New Roman,Times,serif"><span dir="RTL" lang="FA" style="font-size:12pt"><span style="color:black">مطالعه اثر</span></span><span dir="RTL" lang="AR-YE" style="font-size:12pt"><span style="color:black"> شیت سلولی واسکفلد سلول زدایی شده بر تمایز سلولهای بنیادی مزانشیمی به هپاتوسیتها</span></span></span></p> |
| چکیده انگلیسی طرح | In the present study, first the samples will be obtained from subcutaneous tissue of donors, then mesenchymal stem cells (MSCs) will be isolated by proper methods. Subsequently will be characterized by flow cytometry and morphology. The MSCs will be cultivated in medium containing growth factors and FBS and antibiotics with subsequent hepatic differentiation induction by proper growth factors. The hepatic differentiation evaluation will be performed by gene expression analysis by RT-PCR for Albumin, AFP. In the next step thermosensitive polmer (pNIPAAm) will be synthesized using free radical or open ring polymerization. The thermal and chemical properties of polymers will be checked. For sterilization of synthesized polymer, the polymer will be incubated by ethylene oxide for 2 hours with following PBS washing, then will be dissolved in routine media. At the end the prepared sheet will be released by thermal reduction. At the next step, decellularization of rat liver tissue will be performed. |
| کلمات کلیدی | شیت سلولی :تشکیل لایه یا لایه هایی از سلولها با واسطه استفاده از پلیمرها یا نانوپارتیکلهای مگنتیت Decellolarization:فرایندی که طی آن سلولهای بافت خارج می شوندوفقط ماتریکس خارج سلولی باقی می ماند. پزشکی باز ساختی (Regenarative Medicine): جایگزینی بافت های از دست رفته با بافتی زنده و دارای عملکرد مناسب با روشهای مختلف. سلولهای بنیادی مزانشیمی: از جمله سلولهای بنیادی بالغ هستند که از بافتهایی نظیر چربی،استخوان،ماهیچه و....استخراج می گردند. تمایز: فرایندی که طی آن سلولها اختصاصیت می یابند. |
| ذینفعان نتایج طرح | افراد دارای بیماریهای کبدی |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| عفت علیزاده | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| نصرت اله ضرغامی | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| ابوالفضل اکبرزاده | مشاور |
| رویا صالحی قره ورن | مشاور |
| مریم اسدی | دانشجوی مالک پایان نامه |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر در صفحه سلولی تولید شده بر روی پلیمر حساس دمایی ترکیب شده با ماتریکس سلول زدایی عملکرد سلولهای کبدی بهینه گردید.متن خبر هدف این مطالعه ارزیابی مارکرهای عملکردی کبدی در صفحه سلولهای کبدی تولید شده با پلیمر حساس دمایی در مقایسه با صفحه سلولی تولید شده در ماتریکس سلول زدایی شده کبدی بود با توجه به یافته های این تحقیق هیدروژل نیپام به عنوان پلیمر حساس دمایی در حالت ادغام شده با ماتریکس سلول زدایی شده به عنوان بستر جامد عملکرد سلولهای کبدی تمایز یافته از سلولهای بنیادی مزانشیمی را به خوبی هدایت کرد که با سطح بالای البومین، اوره ، افزایش بیان ژنهای اختصاصی کبدی و سطح گلیکوژن در سلولهای شبه کبدی در یافته ها مشخص شد. همچنین ادغام ماتریکس سلول زدایی در هیدروژل نیپام می تواند به ایجاد ریز محیط جهت هدایت سلولهای بنیادی مزانشیمی مشتق از یافت چربی به سوی تمایز و تکثیر کمک نماید. در نهایت نتیجه گیری شد که ماتریکس سلول زدایی شده به همراه پلیمرهای حساس به دما می تواند سطح هوشمندی برای توسعه صفحه های سلولی کبدی را فراهم نماید که در شرایط یکسان آزمایشگاهی حتی بهتر از خود ماتریکس سلول زدایی شده عمل می کند. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
