بررسی اثر نانوذرات بارگیری شده با مولکولهای siRNA ضد gp130 و S1PR1 بر روی بقا و تکثیر سلولهای توموری
Investigation of the effect of nanoparticeles loaded with the siRNA molecules against gp130 and S1PR1 on the tumor cell’s proliferation and viability .
مجریان: فرهاد جدیدی نیارق
خلاصه روش اجرا: از رده های سلول های سرطانی 4T1 (سرطان پستان) و و B16F10 ( ملانوما ) در این مطالعه استفاده خواهد شد. این رده های سلولی در محیط RPMI1640 حاوی 10% fetal bovine serum و آنتی بیوتیک کشت داده می شوند. پس از گذشت ۲۴ ساعت از کشت سلولی نانوذرات حاوی siRNA را به محیط کشت هر رده سلولی اضافه می کنیم. میزان تاثیر نانوذرات بارگیری شده با siRNA بر روی بیان ژن gp130و S1PR1 در کشت سلول ها Real- time PCR و تولید IL-6 را توسط تکنیک های ELISAدر فواصل زمانی مختلف بررسی می شود. تاثیر نانوذرات حاوی siRNA بر روی حیات سلولی توسط آزمون MTT ارزیابی می شود. علاوه بر این میزان تاثیر نانوذرات بارگیری شده با siRNA بر روی فاکتور پیش آپوپتوزی Bax فاکتور ضد آپوپتوزی Bcl-2 با استفاده از تکنیک Real-time PCR در فواصل زمانی مختلف بررسی می شود. پس از گذشت ۲۴ ساعت از کشت سلولی طبق جدول زیر کشت های هر رده سلولی را به پنج گروه تقسیم میکنیم و نانوذرات حاوی siRNA را طبق جدول زیر به محیط کشت هر گروه اضافه می کنیم.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا در دانشکده/مرکز |
| کد طرح | 58676 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی اثر نانوذرات بارگیری شده با مولکولهای siRNA ضد gp130 و S1PR1 بر روی بقا و تکثیر سلولهای توموری |
| عنوان لاتین طرح | Investigation of the effect of nanoparticeles loaded with the siRNA molecules against gp130 and S1PR1 on the tumor cell’s proliferation and viability . |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | سیستم های نوین دارورسانی |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | کارشناسی ارشد |
| مدت اجرا - ماه | 14 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | Gp130 جزء مشترک کمپلکس گیرنده سایتوکاینهای خانواده IL-6 است که در ارسال سیگنالینگ القا شده توسط این سایتوکاینها شرکت دارد و باعث افزایش STAT3 میشود بنابراین میتوان با مهار بیان این گیرنده سطحی از ارسال سیگنال توسط این دسته از سایتوکاینها جلوگیری کرد. از طرفی STAT3 فعال شده از طریق IL-6 به دلیل حضور مکانیسمهای تنظیم کننده موقت است و بیان این فاکتور رونویسی از طریق یک مکانیسم حلقه ای تقویتی القا شده توسط مولکول سطحی S1PR1 بطور دائم القا میشود بگونه ای که STAT3 فعال شده از سیگنالینگ IL-6 باعث بیان S1PR1 میشود و سیگنالینگ القا شده از برهمکنش S1P-S1PR1 بیان این فاکتور رونویسی را بطور دائم القا میکند و باز هم STAT3 تولید IL-6 را افزایش میدهد. بنابراین در این مطالعه بلاک کردن این حلقه تقویتی هدف ما قرار گرفته است تا از بیان دائمی STAT3 و مولکولهای محرک آن جلوگیری به عمل آوریم که تاکنون در مطالعه ای از این روش ترکیبی استفاده نشده است. در این مطالعه ما به کمک نانوذرات و RNAهای مداخله گر به صورت هدفمند این روش درمانی ترکیبی را به کار خواهیم برد که کارایی درمان را بالا برده و عوارض سیستمیک ناشی از تزریق به بدن موجود زنده بدنبال نخواهد داشت. |
| اهداف اختصاصی | <p><strong>تولید نانو ذرات کیتوزان لاکتات حاوی siRNA </strong></p>-<p><strong>مطالعه in vitro اثر بخشی نانو ذرات تهیه شده</strong></p> |
| چکیده انگلیسی طرح | از رده های سلول های سرطانی 4T1 (سرطان پستان) و و B16F10 ( ملانوما ) در این مطالعه استفاده خواهد شد. این رده های سلولی در محیط RPMI1640 حاوی 10% fetal bovine serum و آنتی بیوتیک کشت داده می شوند. پس از گذشت ۲۴ ساعت از کشت سلولی نانوذرات حاوی siRNA را به محیط کشت هر رده سلولی اضافه می کنیم. میزان تاثیر نانوذرات بارگیری شده با siRNA بر روی بیان ژن gp130و S1PR1 در کشت سلول ها Real- time PCR و تولید IL-6 را توسط تکنیک های ELISAدر فواصل زمانی مختلف بررسی می شود. تاثیر نانوذرات حاوی siRNA بر روی حیات سلولی توسط آزمون MTT ارزیابی می شود. علاوه بر این میزان تاثیر نانوذرات بارگیری شده با siRNA بر روی فاکتور پیش آپوپتوزی Bax فاکتور ضد آپوپتوزی Bcl-2 با استفاده از تکنیک Real-time PCR در فواصل زمانی مختلف بررسی می شود. پس از گذشت ۲۴ ساعت از کشت سلولی طبق جدول زیر کشت های هر رده سلولی را به پنج گروه تقسیم میکنیم و نانوذرات حاوی siRNA را طبق جدول زیر به محیط کشت هر گروه اضافه می کنیم. |
| کلمات کلیدی | Gp130: گلیکوپروتئین 130به عنوان یک جزء ساختاری مشترک و انتقال دهنده مشترک سیگنال در کمپلکس گیرنده مجموعه سایتوکاینهای IL-6 میباشد. S1P: اسفنگوزین 1-فسفات یک اسفنگولیپید القا کننده سیگنالینگ است ،که با عنوان لیزواسفنگولیپید نیز شناخته میشود. S1P یک مدیاتور لیپیدی فعال زیستی بشمار میرود که پیامبر ثانویه داخلی و لیگاند خارج سلولی گیرنده های جفت شده با G پروتئین های S1PR ها میباشد. S1P یک تنظیم کننده مهم سیستم عروقی و سیستم ایمنی بدن است و سیگنالینگ القا شده توسط آن باعث تحریک مهاجرت سلولهای ایمنی میشود ودر سلولهای سرطانی هم دیده شده است که باعث رشد بیشتر و مقاومت به آپوپتوز و تحریک متاستاز میشود. نحوه تشکیل آن هم به این صورت است که اسفنگومیلین توسط اسفنگومیلیناز به سرامید و آن هم توسط سرآمیداز به اسفنگوزین تبدیل میشود و اسفنگوزین توسط دو اسفنگوکیناز به نام های SPHK1,2 به S1P تبدیل میشود. :S1PR1 یکی از 5 گیرنده جفت شده با G پروتئین است که بهS1P متصل میشود و القای سیگنالینگ STAT3 انجام میدهد IL-6 :اینترلوکین ۶ یکی از سایتوکین های مهم سیستم ایمنی است که در پاسخ به میکروب ها و سایر سایتوکین ها مثل TNF و اینترلوکین ۱ توسط فاگوسیت های تک هسته ای ، اندوتلیال عروق ، فیبروبلاست ها و سلول های Tفعال تولید می شود و هم در ایمنی ذاتی و هم ایمنی اکتسابی نقش دارد. RNA: siRNA مداخله گر (RNAi) اصطلاح کلی است که به تکنولوژی خاموشی پس از رونویسی توسط RNA دو رشته ای اطلاق گردیده و در گیاهان با اصطلاح PTGS عنوان می شود .در تکنولوژی RNA مداخله گر (RNAi) ، رشته مکمل mRNA ژن مورد نظر ساخته شده و این رشته به mRNA ژن هدف متصل و یک توالی دورشته ای (dsRNA) را بوجود می آورد. از آنجا که سیستم سنتز پروتئین قادر به ترجمه mRNA دو رشته ای نمی باشد، بیان ژن هدف متوقف و اصطلاحاً ژن خاموش می شود. کیتوزان :کیتوزان یک آمینو پلی ساکارید خطی و ترکیبی از پیوند های (۴→۱ β) واحدهای D-گلوکزآمین وN-استیل -D-گلوکزآمین است. کیتوزان توسط داستیلاسیون کیتین ( پلی ساکارید طبیعی و فراوان موجود در اسکلت خارجی سخت پوستانی همچون خرچنگ و میگو)، تهیه می شود. این پلی ساکارید کاتیونی به دلیل دسترس پذیری فراوان، چسبندگی بی نظیر، خواص دارویی مناسب و دیگرخواص سودمند بیولوژیکی مثل زیست سازگاری، زیست تخریب پذیری، عدم سمیت و تحریک کم سیستم ایمنی، در موارد بیوپزشکی و دارویی مورد توجه گسترده قرارگرفته است. STAT3 :یکی از اعضای خانواده STAT است که توسط ژن STAT3 تولید می شود. در سیتوپلاسم به صورت مونومر های غیر فعال وجود دارند که در پاسخ به سایتوکین ها و فاکتور های رشد توسط JAK فسفریله شده و تشکیل همودایمر می دهند و به هسته نقل مکان کرده و با اتصال به توالی های خاص نسخه برداری ژن های مربوطه را تحریک می کنند. |
| ذینفعان نتایج طرح |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| فرهاد جدیدی نیارق | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| توحید کاظمی | مشاور |
| نرگس رستمی | دانشجوی مالک پایان نامه |
| فاطمه اطیابی | مشاور |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر نانوذرات بارگیری شده با مولکول های siRNA ضد S1PR1 و GP130 موجب مهار رشد سرطان می شوندمتن خبر در مطالعات پیشین ثابت شده است که بینS1PR1 ، STAT3 و IL-6 یک ارتباط و شبکه به هم پیوسته وجود دارد. مسیرهای سیگنالینگ S1P-S1PR1 و IL6-GP130 باعث فسفوریلاسیون STAT3 و فعال شدن آن می شوند ، STAT3 سپس بیان S1PR1 و IL-6 را در یک حلقه بازخورد مثبت القا می کند. هدف مطالعه ما مهار این حلقه تقویتی بود. ما همچنین نانوذرات تری متیل کیتوزان کونژوگه شده با آلژینات را برای انتقال موثر siRNA ها به محل تومور تهیه کردیم. ما با هدف بررسی تأثیر نانوذرات بارگیری شده با siRNA در شرایط in vitro بر روی علائم تومور سه رده سلولی سرطان 4T1(سرطان سینه) ، B16 (ملانوما) ،و CT26 (سرطان روده بزرگ) ، که بیان S1PR1 و GP130 اثبات شده است ، مطالعه کردیم. در مجموع داده های به دست آمده از مطالعه ما تأثیرات مهارکننده تومور در هدف قرار دادن ترکیبی S1PR1 و GP130 توسط نانوذرات ALG-TMC siRNA را نشان می دهند. در این مطالعه برای اولین بار این حلقه بازخورد مثبت را هدف قرار داده و از این ترکیب درمانی جدید استفاده کردیم که می تواند در آینده در شرایط in vivo بیشتر بررسی گردد. |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر نانوذرات بارگیری شده با مولکول های siRNA ضد S1PR1 و GP130 موجب مهار رشد سرطان می شوندمتن خبر در مطالعات پیشین ثابت شده است که بینS1PR1 ، STAT3 و IL-6 یک ارتباط و شبکه به هم پیوسته وجود دارد. مسیرهای سیگنالینگ S1P-S1PR1 و IL6-GP130 باعث فسفوریلاسیون STAT3 و فعال شدن آن می شوند ، STAT3 سپس بیان S1PR1 و IL-6 را در یک حلقه بازخورد مثبت القا می کند. هدف مطالعه ما مهار این حلقه تقویتی بود. ما همچنین نانوذرات تری متیل کیتوزان کونژوگه شده با آلژینات را برای انتقال موثر siRNA ها به محل تومور تهیه کردیم. ما با هدف بررسی تأثیر نانوذرات بارگیری شده با siRNA در شرایط in vitro بر روی علائم تومور سه رده سلولی سرطان 4T1(سرطان سینه) ، B16 (ملانوما) ،و CT26 (سرطان روده بزرگ) ، که بیان S1PR1 و GP130 اثبات شده است ، مطالعه کردیم. در مجموع داده های به دست آمده از مطالعه ما تأثیرات مهارکننده تومور در هدف قرار دادن ترکیبی S1PR1 و GP130 توسط نانوذرات ALG-TMC siRNA را نشان می دهند. در این مطالعه برای اولین بار این حلقه بازخورد مثبت را هدف قرار داده و از این ترکیب درمانی جدید استفاده کردیم که می تواند در آینده در شرایط in vivo بیشتر بررسی گردد. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
