جداسازی و ارزیابی قطعات کوچک نواحی متغیر آنتی بادی (scFv) علیه رده سلولی سرطانی غیرمتاستاتیک معده AGS از کتابخانه آنتی بادی انسانی عرضه شده در فاژ
Isolation and Characterization of Human ScFv Antibody Fragments to Non-metastatic Gastric Cancer(AGS) from a Synthetic Phage Display Antibody Library
مجریان: محمد نوری , محمد رضا توحیدکیا
خلاصه روش اجرا: پس از آماده سازی کتابخانه مورد نظر و تهیه فاژ کمکی، فاژهای نوترکیب را از کتابخانه که در داخل باکتری قرار گرفته است بیرون ریخته و برای panning علیه سلول های AGS آماده می گردد. panning در فاز سوسپانسیون و به صورت (positive/negative) counter selection انجام می گیرد. بدین صورت که در هر مرحله panning، ابتدا کتابخانه فاژی با سلول های سرطانی متاستاتیک معده MKN-45 انکوبه می شود تا آنتی بادی های ناخواسته و نامرتبط حذف گردند. سپس مایع رویی با سلول های سرطانی غیرمتاستاتیک معده AGS انکوبه می شود. پس از 3-5 دور panning، روند پیشرفت کار توسط پلی کلونال فاژ مراقبت می شود. به منظور غربال گری، تک کلون های آنتی بادی scFv از مرحله مورد نظر panning، در پلیت های 96 خانه ای شبانه کشت داده شده و مایع رویی حاوی قطعات scFv برای مونو کلونال ELISA به کار برده می شود. کلون های آنتی بادی اختصاصی انتخاب شده پس از تعیین توالی برای بیان و تخلیص آماده می شوند. پس از تایید بیان، ویژگی کلون های آنتی بادی با Whole Cell ELISA تعیین خواهد شد.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا در دانشکده/مرکز |
| کد طرح | 57580 |
| عنوان فارسی طرح | جداسازی و ارزیابی قطعات کوچک نواحی متغیر آنتی بادی (scFv) علیه رده سلولی سرطانی غیرمتاستاتیک معده AGS از کتابخانه آنتی بادی انسانی عرضه شده در فاژ |
| عنوان لاتین طرح | Isolation and Characterization of Human ScFv Antibody Fragments to Non-metastatic Gastric Cancer(AGS) from a Synthetic Phage Display Antibody Library |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | اپیدمیولوژی، پیشگیری، تشخیص زودهنگام، درمان و بازتوانی در سرطانهای شایع |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | کارشناسی ارشد |
| مدت اجرا - ماه | 16 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | تومور بدخیم معده چهارمین سرطان شایع و دومین علت مرگ و میر ناشی از سرطان در دنیا می باشد و روش های شیمی درمانی موجود قادر به هدف گیری اختصاصی سلول ها و بافت های سرطانی نبوده و سبب مرگ بافت های سالم نیز می شوند. بنابراین به شدت به روش های درمانی جدیدی مبتنی بر هدف گیری اختصاصی سلول های سرطانی با حداقل آسیب به سلول های سالم مورد نیاز است. از این رو تلاش برای شناسایی پروتئین های سطحی سلول های سرطانی با تولید آنتی بادی علیه آن ها، در راستای کشف اهداف مولکولی جدید و اختصاصی تر (Target Discovery) برای درمان سرطان معده بسیار حائز اهمیت است. |
| اهداف اختصاصی | <p dir="RTL">جداسازی و غربال گری قطعات کوچک نواحی متغیر آنتی بادی <span dir="LTR">(scFv)</span> علیه رده سلولی سرطانی غیرمتاستاتیک معده <span dir="LTR">AGS</span> از کتابخانه <span dir="LTR">I</span> آنتی بادی فاژ </p>-<p dir="RTL" style="margin-right: 85pt;">تعیین تنوع کلون های جداشده به وسیله توالی یابی</p>-<p><span style="font-size:14px"><span style="font-family:arial,helvetica,sans-serif"><span dir="RTL" lang="FA">بیان قطعات anti-AGS scfv در E.coli و تخلیص قطعات </span><span dir="RTL" lang="AR-YE">مربوطه</span></span></span></p>-<p><span style="font-family:arial,helvetica,sans-serif"><span style="font-size:14px"> <span dir="RTL" lang="AR-YE">تعیین ویژگی قطعات آنتی بادی</span></span></span> scFv تخلیص شده به وسیله Whole Cell ELISA</p> |
| چکیده انگلیسی طرح | After preparing the desired library and preparing the helper phage, the recombinant phages are poured out of the library that is inside the bacteria and prepared for panning against AGS cells. Panning is performed in the suspension phase and as a (positive/negative) counter selection. In this way, in each panning step, the phage library is first incubated with metastatic gastric cancer cells MKN-45 to remove unwanted and irrelevant antibodies. Then the supernatant is incubated with non-metastatic gastric cancer cells AGS. After 3-5 rounds of panning, the progress of the work is monitored by polyclonal phage. For screening, scFv antibody single clones from the desired panning step are cultured in 96-well plates overnight and the supernatant containing scFv fragments is used for monoclonal ELISA. The selected specific antibody clones are prepared for expression and purification after sequencing. After confirming expression, the specificity of the antibody clones will be determined by Whole Cell ELISA. |
| کلمات کلیدی | فاژ دیسپلی (Phage Display): نمایش و بیان هر پروتئین اعم از آنتی بادی و پپتید در سطح فاژ به همراه یکی از پروتئین های پوششی فاژ را فاژ دیسپلی می نامند. (single chain fragment variable)scFv: آنتی بادی قطعات مناطق متغیر آنتی بادی تک زنجیره ای فقط از نواحی متغیر زنجیره های سنگین و سبک مولکول های ایمنو گلوبولین تشکیل شده است که به وسیله یک رابط پپتیدی پانزده اسیدآمینه ای به همدیگر متصل گردیده اند. انتخاب(panning): جداسازی فاژ آنتی بادی های مهندسی شده با میل ترکیبی بالا علیه هدف مورد نظر. Whole Cell Panning: panning با استفاده از سلول های زنده کامل را گویند. |
| ذینفعان نتایج طرح | ذینفعان این طرح بیماران مبتلا به سرطان معده خواهند بود و از قطعات آنتی بادی تک زنجیره ای جدا شده در کار های تحقیقاتی، ایمنوتراپی سرطان و رساندن هدفمند داروهای سرطانی استفاده خواهد شد. |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| محمد نوری | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| محمد رضا توحیدکیا | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| علی اکبر رحیم رحیمی | مشاور |
| سپیده نیک فرجام | دانشجوی مالک پایان نامه |
| طیبه مهدی پور | همکار اصلی |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر جداسازی قطعات آنتی بادی انسانی اختصاصی علیه سرطان معدهمتن خبر تومور بدخیم معده چهارمین سرطان شایع در جهان می باشد. روش های شیمی درمانی موجود قادر به هدف گیری اختصاصی سلول های سرطانی نیستند و علاوه بر انهدام سلول های سرطانی، سبب مرگ بافت های سالم نیز می شوند. بنابراین به روش های درمانی جدیدی مبتنی بر هدف گیری اختصاصی سلول های سرطانی با حداقل آسیب به سلول های سالم مورد نیاز است.
در این مطالعه، چهارده کلون آنتی بادی اختصاصی علیه سلول های سرطانی معده جدا شدند و سپس چهار کلون برتر طبق نتایج مورد بررسی قرار گرفتند. کلون با درجات اختصاصیت و ویژگی بالایی به سلول های هدف متصل شدند و هیچ گونه اتصال غیراختصاصی به سلول های سالم و نوع دیگری از سلول های سرطانی نشان ندادند.
شناسایی پروتئین های سطحی سلول های سرطانی با تولید آنتی بادی علیه آن ها، در راستای کشف اهداف مولکولی جدید و اختصاصی تر برای درمان سرطان معده بسیار حائز اهمیت است. آنتی بادی های جداشده می توانند برای تجزیه و تحلیل پروتئین های سطحی سلول های سرطانی معده، شناسایی پروتئین های مرتبط با سرطان زایی، تشخیص سرطان و همچنین دارو رسانی هدف دار به سلول های سرطانی معده مورد استفاده قرار گیرند. |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر جداسازی قطعات کوچک نواحی متغیر آنتی بادی انسانی علیه سلولهای سرطانی غیرمتاستاتیک معده از کتابخانه فاژ آنتی بادیمتن خبر در راستای تشخیص به هنگام و درمان موثر سرطان معده، تولید آنتی بادی هایی که توانایی تشخیص افتراقی سلول های سالم و بدخیم را دارند امری ضروری است. تحلیل و مقایسه پروتئین های سطحی سلول ها اطلاعات لازم را برای کشف مارکرهای زیستی که از ملزومات درمان هدف دار سرطان می باشند فراهم می کند.
کلون های آنتی بادی اختصاصی سلول های سرطانی معده با استفاده از تکنیک انتخاب کاهشی بر روی سلول کامل جدا شدند و سپس چهار کلون برتر در طبق نتایج غربالگری با الایزا مورد بررسی قرار گرفتند. آنتی بادی های جدا شده نه تنها به طور اختصاصی به سلول های سرطانی معده هدف (غیرمتاستاتیک) طی الایزا و فلوسایتومتری متصل شدند بلکه قادر به تشخیص افتراقی آن ها از فیبروبلاست های سالم و نوع دیگری از سلول های سرطانی معده (متاستاتیک) بودند.
شناسایی پروتئین های سطحی سلول های سرطانی برای کشف اهداف مولکولی اختصاصی برای درمان سرطان معده حائز اهمیت است. آنتی بادی ها می توانند برای بررسی پروتئین های سطحی سلول های سرطانی، شناسایی پروتئین های مرتبط با سرطان زایی، تشخیص سرطان و دارورسانی هدف دار به سلول های سرطانی مورد استفاده قرار گیرند. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
