بررسی اثرات ضد سرطانی آمیگدالین خالص و عصاره هسته زردآلوی تلخ و شیرین (Prunus armeniaca L.) بر سلول های سرطانی پانکراس
Anticancer effects of pure amygdalin, bitter and sweet apricot kernel extract (Prunus armeniaca L.) on pancreatic cancer cells
مجریان: علیرضا استاد رحیمی , ژاله برار
خلاصه روش اجرا: آمیگدالین خالص و هسته زردآلوی تلخ و شیرین به صورت آماده خریداری خواهند شد. هسته های زردآلو در شرایط آزمایشگاهی خشک و به پودر تبدیل خواهند شد. از روش ماسراسیون برای عصاره گیری استفاده خواهد شد. مقدار مشخصی از هسته های زردآلو در متانول 80 درصد خیسانده شده و بعد از 24 ساعت فیلتر خواهند شد. تفاله باقیمانده هسته زردآلو دوباره با متانول 80 درصد خیسانده شده و فیلتر خواهند شد. حذف حلال مورد استفاده در دمای 40 درجه سانتی گراد با استفاده از دستگاه روتاری انجام خواهد شد. غلظت آمیگدالین عصاره ها با HPLC تعیین خواهد شد. عصاره تهیه شده در دمای 50-40 زیر هود خشک شده و تا زمان مصرف داخل ویال در فریزر نگهداری خواهند شد. برای تهیه غلظت های مورد نظر جهت تیمار کردن سلول ها مقدار مشخصی از آمیگدالین و عصاره را وزن کرده و درDMSO حل کرده و با محیط DMEM رقیق خواهند شد. برای تعیین دوز مداخله ابتدا با MTT سمیت سلولی را محاسبه کرده و IC-50 مشخص خواهد شد. جهت تعیین IC-50 آمیگدالین خالص و عصاره های تهیه شده، سلول ها با غلظت های مختلف آمیگدالین و عصاره ها تیمار شده و به مدت 72-24 ساعت در محیط رشد سلول انکوبه خواهند شد. بعد از تعیین IC-50، در ادامه آزمایشات از غلظت تعیین شده برای انجام سایر تست ها استفاده خواهد شد. اثرات ضد سرطانی آمیگدالین و عصاره هسته زردآلو بر سلول های سرطانی پانکراس مانند PANC-1 یا MIA Paca-2 در مقایسه با سلول های سالم (KDR/293) (سلول های سالم با منشا اپیتلیالی کلیه انسانی) از طریق تست های مختلف شامل MTT assay، DAPI staining و FACS – فلوسایتومتری مورد مطالعه قرار خواهد گرفت. همچنین تاثیر آمیگدالین و عصاره بر میزان بیان ژن های bax ، bcl-2 و کاسپاز 3 با روش real time- PCR بررسی خواهند شد. جهت آنالیز آماری داده ها از نرم افزار SPSS (Version 23) استفاده خواهد شد. در ابتدا نرمال بودن توزیع داده ها با استفاده از آزمون Kolmogorov-Smirnov بررسی شده و جهت مقایسه میانگین بین گروه ها از تحلیل واریانس (ANOVA) و آزمون تعقیبی TUKEY استفاده خواهد شد. P.value کمتر از 05/0 نیز از نظر آماری معنی دار در نظر گرفته خواهد شد.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 57504 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی اثرات ضد سرطانی آمیگدالین خالص و عصاره هسته زردآلوی تلخ و شیرین (Prunus armeniaca L.) بر سلول های سرطانی پانکراس |
| عنوان لاتین طرح | Anticancer effects of pure amygdalin, bitter and sweet apricot kernel extract (Prunus armeniaca L.) on pancreatic cancer cells |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | ارایه الگوهای مناسب برای ارتقـاء شیوههای زندگی سالم با تاکید بـر گروههای آسیب پذیر |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | کارشناسی ارشد |
| مدت اجرا - ماه | 12 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | سرطان رشد کنترل نشده سلول های غیر طبیعی در بدن می باشد. سرطان پانکراس بیماری جدی با بقای 5 ساله کمتر از %5 می باشد که بروز آن سالانه در حال افزایش است. در حال حاضر چهارمین علت مرگ ناشی از سرطان در سراسر جهان است و انتظار می رود تا سال 2030 به دومین عامل مرگ ناشی از سرطان تبدیل شود. عوامل خطر سرطان پانکراس شامل سابقه خانوادگی، گروه خونی AB، پانکراتیت مزمن، دود سیگار، ابتلای طولانی مدت به دیابت نوع 2 ، مصرف زیاد الکل و چاقی می باشند. آپوپتوز یا مرگ برنامه ریزی شده سلولی یک مسیر به شدت کنترل شده است که مسئول از بین بردن سلولهای ناخواسته، سلول های قدیمی و آسیب دیده است. برخی از ترکیبات طبیعی از جمله گیاهان می توانند باعث القای مسیر آپوپتوز شوند که در سلول های سرطانی مسدود شده اند. بنابراین شناسایی گیاهان دارویی که می توانند باعث القای مسیر آپوپتوز شوند ممکن است در تولید داروهای ضد سرطان کمک کند. روش های درمانی رایج در سرطان شامل جراحی، شیمی درمانی، رادیوتراپی و ... می باشند. شیمی درمانی و رادیوتراپی توان حذف اکثر سلول های سرطانی را دارند ولی علاوه بر سلول های سرطانی، سلول های سالم را نیز مورد هدف قرار داده و باعث عوارض جانبی بی شماری می شوند. بنابراین با توجه به این نگرانی ها و عوارض و همچنین مقاومت سلول های سرطانی به درمان های رایج، امروزه علاقه به استفاده از درمانهای مکمل در موازات درمان های رایج که منجر به کاهش علائم و پیشگیری از پیشرفت بیماری شده و از سویی عوارض کمتری نیز داشته باشند، بیشتر شده است. بخشی از این درمان های مکمل مربوط به ترکیبات گیاهی می باشند. از بین 121 داروی تجویز شده برای درمان سرطان، 90 مورد از داروهای گیاهی مشتق شده است. داروهای ضد سرطان استخراج شده از گیاهان در سطح کلینیکی مورد استفاده قرار می گیرند که از آن جمله می توان تاکسول، آلکالوئید وینکا، camptothecin و podophyllotoxin و ... را نام برد. داروهای گیاهی ترکیبات طبیعی پیچیده ای می باشند که در سطح مختلف و به واسطه مکانیسم های مختلف عمل می کنند. از جمله ترکیبات گیاهی می توان به آمیگدالین (B17) اشاره کرد که یک گلیکوزید سیانوژن می باشد و در هسته بسیاری از میوه ها از جمله زردآلو، هلو، آلو، بادام و سیب به فراوانی یافت می شود. ساختمان شیمیایی آمیگدالین از دو مولکول گلوکز، یک بنزآلدئید با اثر ضد دردی و یک هیدروسیانیک اسید با فعالیت ضد نئوپلاسمی تشکیل شده است. طبق مطالعه انجام شده توسط Ernest مکانیسم تاثیر آمیگدالین به این روش است که در همه سلول ها به جز سلول های سرطانی، آنزیم Rhodanese وجود دارد. در صورتی که در بدن سرطان وجود نداشته باشد آنزیم Rhodanese هیدروژن سیانید و بنزآلدئید را به تیوسیانات و بنزوئیک اسید تبدیل می کند که در تغذیه سلول های سالم مفید می باشد ولی در سلول های سرطانی به دلیل نبود این آنزیم آمیگدالین اثرات سمی بر سلول های سرطانی داشته و سلول های سرطانی را از بین می برد. آمیگدالین اثرات ضد دیابتی، ضد آسم و سرفه، ضد درد، ضد سرطانی داشته و می تواند باعث مهار آنژیوژنز نیز شود. اثرات سمیت سلولی و آپوپتوزی آمیگدالین در مطالعات قبلی گزارش شده است. Makarević و همکاران اثر آمیگدالین بر سرطان پروستات را بررسی کردند. آمیگدالین باعث کاهش تعداد سلول های مرحله G2/M و S و افزایش تعداد سلول های G0/G1 شد. همچنین باعث تعدیل پروتئین های چرخه سلولی از جمله cdk 1، cdk 2، cdk 4 و cyclin A، cyclin B و cyclin D3 شد. طبق نتایج مطالعه آمیگدالین فعالیت ضد توموری قابل توجهی در رده های سلولی سرطان پروستات داشت. Chen و همکاران در مطالعه خود اثر آمیگدالین بر القای آپوپتوز در رده سلولی Hela بررسی کردند. نتایج مطالعه نشان داد آمیگدالین زیست پذیری (viability) سلول های سرطانی Hela را کاهش داد و باعث القای آپوپتوز شد. آمیگدالین همچنین باعث کاهش بیان پروتئین Bcl-2 و افزایش بیان پروتئین Bax و نیز افزایش فعالیت کاسپاز3 در سلول های سرطانی شد. در مطالعه Min Lee و Moon اثر آمیگدالین بر رده های سلولی سرطان سینه بررسی شد. طبق نتایج مطالعه آمیگدالین فعالیت سیتوتوکسیک بر رده های سلولی سرطان سینه داشت و باعث القای آپوپتوز در سلول های سرطانی شد و نیز منجر به افزایش بیان پروتئین Bax و کاهش بیان پروتئین Bcl-2، فعال شدن کاسپاز 3 و p38 MAPK شد. Kim و همکاران اثر آمیگدالین بر القای آپوپتوز در رده سلولی سرطان کولون (COLO 201) را بررسی کردند. نتایج نشان داد آمیگدالین اثرات سمیت سلولی وابسته به دوز در سلول های سرطانی داشت و باعث افزایش بیان ژن Bax و کاهش بیان ژن Bcl-2 و نیز افزایش فعالیت کاسپاز 3 در سلول های سرطانی کولون شد. با در نظر گرفتن افزایش شیوع سرطان پانکراس به علت افزایش امید به زندگی و افزایش جمعیت سالمند، اهمیت ترکیبات دارویی گیاهی در درمان سرطان و نتایج گزارش شده از اثرات سمیت سلولی و آپوپتوزی آمیگدالین در مطالعات قبلی و با توجه به اینکه مکانیسم و شدت اثر عوامل ضد سرطانی در بافت ها و سلول های مختلف متفاوت می باشد، لذا اثر ضد سرطانی آمیگدالین خالص برای اولین بار در سلول های سرطانی پانکراس انجام خواهد گرفت. از طرفی طرح حاضر قصد بررسی و مقایسه اثر ضد سرطانی آمیگدالین خالص و عصاره هسته زردآلوی تلخ و شیرین (غنی ترین منابع آمیگدالین) بر سلول های سرطانی پانکراس را نیز دارد و بر اساس جستجوی گسترده مطالعات قبلی تاکنون مطالعه ای در زمینه بررسی و مقایسه اثر آمیگدالین و عصاره هسته زردآلوی تلخ و شیرین بر رده های سلولی سرطانی انجام نیافته است. لذا این مطالعه با هدف بررسی و مقایسه اثرات ضد سرطانی آمیگدالین خالص و عصاره هسته زردآلوی تلخ و شیرین بر سلول های سرطانی پانکراس طراحی شده است. اهداف طرح هدف کلی طرح: تعیین اثرات ضد سرطانی آمیگدالین خالص و عصاره هسته زردآلوی تلخ و شیرین (Prunus armeniaca L.) بر سلول های سرطانی پانکراس اهداف اختصاصی 1) تعیین و مقایسه اثر آمیگدالین و عصاره هسته زردآلوی تلخ و شیرین بر میزان مهار رشد سلول های سرطانی پانکراس (PANC-1 یا MIA Paca-2) و سلول های سالم (KDR/293) 2) تعیین و مقایسه اثر آمیگدالین و عصاره هسته زردآلوی تلخ و شیرین بر القای آپوپتوز در سلول های سرطانی پانکراس (PANC-1 یا MIA Paca-2) و سلول های سالم (KDR/293) 3) تعیین و مقایسه اثر آمیگدالین و عصاره هسته زردآلوی تلخ و شیرین بر میزان بیان ژن های bax ، bcl-2 و کاسپاز 3 در سلول های سرطانی پانکراس (PANC-1 یا MIA Paca-2) و سلول های سالم (KDR/293) |
| اهداف اختصاصی | <p><span style="font-family:arial,helvetica,sans-serif">تعیین و مقایسه اثر آمیگدالین و عصاره هسته زردآلوی تلخ و شیرین بر میزان مهار رشد سلول های سرطانی پانکراس (PANC-1 یا MIA Paca-2) و سلول های سالم (KDR/293)</span></p>-<p><span style="font-family:arial,helvetica,sans-serif">تعیین و مقایسه اثر آمیگدالین و عصاره هسته زردآلوی تلخ و شیرین بر القای آپوپتوز در سلول های سرطانی پانکراس (PANC-1 یا MIA Paca-2) و سلول های سالم (KDR/293)</span></p>-<p><span style="font-family:arial,helvetica,sans-serif">تعیین و مقایسه اثر آمیگدالین و عصاره هسته زردآلوی تلخ و شیرین بر میزان بیان ژن های bax ، bcl-2 و کاسپاز 3 در سلول های سرطانی پانکراس (PANC-1 یا MIA Paca-2) و سلول های سالم (KDR/293)</span></p> |
| چکیده انگلیسی طرح | ......................................................................................................................................................................................................................................................................... |
| کلمات کلیدی | آپوپتوز: آپوپتوز یا مرگ برنامه ریزی شده سلولی یک مسیر به شدت کنترل شده است که مسئول از بین بردن سلولهای ناخواسته، سلول های قدیمی و آسیب دیده است و نقش عمده ای به عنوان یک روش محافظتی در برابر سرطان با از بین بردن آسیب و یا سلول های غیر طبیعی ایفا می کند. غیر فعال شدن آپوپتوز نقش مهمی در ایجاد سرطان و پاسخ آن به درمان دارد. رده سلولی MIA Paca-2 : رده سلول های آدنوکارسینومای پانکراس انسانی رده سلولیPANC-1 : رده سلولی پیوسته از سلول های کارسینومای پانکراس اگزوکرین انسانی رده سلولی KDR/293 : رده سلول های سالم با منشا اپیتلیالی کلیه انسانی MTT assay : ارزیابی فعالیت آنزیم های سلولی در احیا tetrazolium dye به فورمازان نامحلول آن و تولید یک رنگ ارغوانی که منعکس کننده تعداد سلول های زنده موجود در محیط است. Apoptosis assay : شامل بررسی کیفی و کمی آپوپتوز در سلول های سرطانی تیمار شده با آمیگدالین و عصاره هسته زردآلو به ترتیب با روش های DAPI staining و روش FACS – فلوسایتومتری است. تعيين کننده اجتماعي سلامت |
| ذینفعان نتایج طرح | با توجه به افزایش شیوع و مرگ و میر ناشی از سرطان پانکراس در دهه های اخیر، امید است نتایج حاصل از این مطالعه بتواند در راستای ارائه راهکاری مناسب جهت انجام مطالعات تکمیلی استفاده شود. |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| علیرضا استاد رحیمی | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| ژاله برار | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| فاطمه تمجید | دانشجوی مالک پایان نامه |
| یلدا رهبرسعادت | همکار اصلی |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر آمیگدالین خالص و عصاره هسته زردآلوی تلخ و شیرین می توانند در درمان سرطان پانکراس موثر باشند.متن خبر سرطان یکی از مشکلات بزرگ بهداشت عمومی و دومین عامل اصلی مرگ و میر در جهان است. سرطان پانکراس بیماری جدی با بقای 5 ساله کمتر از 5 درصد می باشد که بروز آن سالانه در حال افزایش است. این بیماری چهارمین علت مرگ ناشی از سرطان در سراسر جهان بوده و انتظار می رود تا سال 2030 به دومین عامل مرگ ناشی از سرطان تبدیل شود. عصاره اتانولی هسته زردآلوی تلخ و شیرین و آمیگدالین باعث مهار رشد سلول های سرطانی پانکراس می شوند و بیشترین تاثیر مهار رشد سلول های سرطانی، مربوط به عصاره هسته زردآلوی تلخ بود. بر اساس نتایج رنگ آمیزی DAPI و فلوسایتومتری، هر سه تیمار باعث القای آپوپتوز در سلول های سرطانی PANC-1 پانکراس شدند. همچنین افزایش بیان ژن های Bax و کاسپاز-3 و کاهش بیان ژن Bcl-2 تایید کننده آپوپتوز بود. طبق نتایج، هر سه تیمار به عنوان عامل پیش برنده آپوپتوز در سلول های سرطانی پانکراس عمل می کنند، در حالی که اثر معنی داری بر سلول های سالم ندارند و عصاره اتانولی هسته زردآلوی تلخ بیشترین تاثیر بر مهار رشد و القای آپوپتوز در سلول های سرطانی پانکراس را دارد. بنابراین شناسایی سایر مواد موثره هسته زردآلوی تلخ با اثر ضد سرطانی ضروری می باشد. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
