بررسی فراوانی و فاکتورهای اپی ژنتیک موثر در تکامل سلول های T reg و Th17 و exhausted T cells در بیماران مبتلا به سقط مکرر (RPL)
Investigation of frequency and epigenetic factors of T reg, Th17 and exhausted T cells in recurrent pregnancy loss (RPL) patients
مجریان: مهدی یوسفی
خلاصه روش اجرا: از افراد مبتلا به RPL و گروه کنترل که جمعیت های مورد مطالعه ما در این تحقیق هستند رضایت نامه¬ی کتبی و آگاهانه دریافت خواهد شد. سپس از این افراد خون هپارینه گرفته شده و با استفاده از فایکول 1.077 سلول های تک هسته ای خون (PBMC) جدا میشوند. جهت شمارش جمعیت هر کدام از سلول های مورد نظر در مطالعه شامل سلول های Treg, Th17 و لنفوسیت های T exhausted از روش فلوسایتومتری استفاده میشود. جمعیت لنفوسیت های T از نظر میزان متیلاسیون ژنهای مولکول های T-bet فاکتور رونویسی اصلی سلول های Th1 و GATA-3 فاکتور رونویسی اصلی سلول های Th2، همچنین IRF-4 از جمله فاکتورهای رونویسی در ارتباط با Th17 و GITR از جمله مولکول های بیان شده در سطح سلول های Treg با روش QMSP بررسی خواهند شد. برای بررسی میزان بیان ژن این مولکول ها نیز با استفاده از تکنیک QRT-PCR سطح بیان mRNA مربوط به این پروتئین ها مورد بررسی قرار خواهد گرفت. میزان میکرو RNAهای PBMC های خون محیطی هم با استفاده از تکنیک Quantitative PCR مورد بررسی قرار خواهند گرفت. حجم نمونه در این مطالعه با کمک مطالعات قبلی 20 بیمار در نظر گرفته شده است وتعداد 20 نفر هم بعنوان گروه کنترل خواهند بود که متشکل از زنان سالم و بارور می باشند.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا در دانشکده/مرکز |
| کد طرح | 57502 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی فراوانی و فاکتورهای اپی ژنتیک موثر در تکامل سلول های T reg و Th17 و exhausted T cells در بیماران مبتلا به سقط مکرر (RPL) |
| عنوان لاتین طرح | Investigation of frequency and epigenetic factors of T reg, Th17 and exhausted T cells in recurrent pregnancy loss (RPL) patients |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | کاهش ناتوانی و عوارض اختلالات باروری و درمان ناباروری |
| نوع مطالعه | مطالعه مورد/شاهد ( Case - Control ) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | کارشناسی ارشد |
| مدت اجرا - ماه | 16 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | فراوانی سلول های Th1 و Th2 و تعادل میان این سلول ها به وفور در ارتباط با سقط مکرر بررسی شده است اما به تازگی توجه بیشتری بر روی سلول های رده T کمکی از جمله سلول های Th17 و T reg و گروه دیگری از سلول ها به نام exhausted T cell وجود دارد اما مطالعات محدودی در این زمینه وجود دارد. با توجه به نقش این سلول ها در موفقیت بارداری، تغییرات این جمعیت سلولی در گروه بیمار نسبت به گروه کنترل، در این مطالعه مورد بررسی قرار میگیرد که میتواند اطلاعاتی در راستای پیش آگهی و شناخت علل مرتبط با بروز سقط در این افراد ارائه دهد. از طرفی در این مطالعه به بررسی اثرات فاکتورهای اپی ژنتیکی بر تعداد و عملکرد سلول ها خواهیم پرداخت که امروزه توجه بیشتری به سوی این متغیرها معطوف شده است، در این رابطه به بررسی فاکتورهای اپی ژنتیکی موثر بر لنفوسیت های T، از جمله بررسی متیلاسیون مولکول های T-bet فاکتور رونویسی اصلی سلول های Th1 و GATA-3 فاکتور رونویسی اصلی سلول های Th2، همچنین IRF-4 از جمله فاکتورهای رونویسی در ارتباط با Th17 و GITR از جمله مولکول های بیان شده در سطح سلول های Treg با استفاده از تکنیک QMSP خواهیم ¬پرداخت. بررسی میزان بیان این مولکول های پروتئینی با تکنیک QRT-PCR در کنار بررسی فاکتور های اپی ژنتیکی موثر در بیان آنها در گروه بیمار و گروه کنترل می¬تواند بر دانش ما در رابطه با عملکرد این سلول ها در باروری و ناباروری بیفزاید. پس از بررسی فراوانی سلول های Treg و Th17 در خون محیطی زنان مبتلا به سقط مکرر (RPL) اندازه گیری سطح بیان میکرو RNA های مرتبط با این سلول ها میتواند به عنوان بیومارکری جهت شناسایی تغییرات این سلول ها در بیماران مورد استفاده قرار گیرد. |
| اهداف اختصاصی | <p dir="RTL" style="margin-right:85.0pt">بررسی فراوانی سلول های <span dir="LTR">Th17</span> و <span dir="LTR">T reg</span> و <span dir="LTR">T exhausted</span> در بیماران مبتلا به سقط مکرر<span dir="LTR">(RPL)</span></p>-<p dir="RTL">بررسی میکرو<span dir="LTR">RNA</span> های مرتبط با <span dir="LTR">Th17</span> و <span dir="LTR">T reg</span> در سلول های تک هسته ای خون محیطی بیماران مبتلا به سقط مکرر</p>-<p dir="RTL">بررسی متیلاسیون ژن های T-bet, GATA-3, IRF-4 و GITR در لنفوسیت های T خالص شده خون محیطی بیماران مبتلا به سقط مکرر</p>-<p dir="RTL" style="margin-right:85.0pt">بررسی میزان بیان ژن های T-bet, GATA-3, IRF-4 و GITR در سلولهای تک هسته ای خون محیطی بیماران مبتلا به سقط مکرر در مقایسه با گروه کنترل</p> |
| چکیده انگلیسی طرح | Written informed consent will be obtained from individuals with RPL and the control group, which are the populations studied in this study. Then, heparinized blood will be taken from these individuals and peripheral blood mononuclear cells (PBMC) will be separated using Ficoll 1.077. Flow cytometry will be used to count the population of each of the cells of interest in the study, including Treg, Th17 cells, and exhausted T lymphocytes.The T lymphocyte population will be examined in terms of the methylation level of genes of molecules T-bet, the main transcription factor of Th1 cells, and GATA-3, the main transcription factor of Th2 cells, as well as IRF-4, including transcription factors associated with Th17, and GITR, including molecules expressed on the surface of Treg cells, using the QMSP method.To examine the gene expression levels of these molecules, the mRNA expression levels of these proteins will be examined using the QRT-PCR technique. The levels of microRNAs in peripheral blood PBMCs will also be examined using the Quantitative PCR technique. The sample size in this study is 20 patients with the help of previous studies, and 20 people will be considered as a control group, consisting of healthy and fertile women. |
| کلمات کلیدی | RPL : وقوع ۲ یا بیش از ۲ بار شکست متوالی حاملگی را RPL گویند. TGF-b : سایتوکاین مهاری است که در تکامل سلول های Treg محیطی نقش دارد و توسط این سلول ها تولید می¬شود و همراه با سایتوکاین های تولید شده در جریان پاسخ های ایمنی ذاتی همانند IL-6وIL-1 ، تکامل زیر رده Th17 را با استفاده از توانایی خود در القا فاکتور رونویسی RoRγt، افزایش می¬دهد. TNF-a: از سایتوکاین های دخیل در التهاب سیستمیک و یکی از سایتوکاین های عامل ایجاد واکنش های فاز حاد MMP: خانواده ای از آنزیمهای تجزیه کننده¬ی ماتریکس خارج سلولی دخیل در بسیاری از فرآیند های فیزیولوژیک اعم از اتصال رویان به دیواره¬ی رحم و رشد آن، رگ زایی، ترمیم زخم و ... و پاتولوژیک همچون متاستاز PD-1: Programmed cell death protein 1 ، پروتئین مرگ برنامه ریزی شده¬ی سلولی 1 یا CD279 که در انسان به وسیله¬ی ژن PDCD1 کد می¬شود و گیرنده¬ی بیان شده در سطح سلول های T و pro-B می¬باشد و پس از اتصال به لیگاند باعث تنظیم منفی پاسخ های ایمنی خواهد شد. TIM-3: T-cell immunoglobulin and mucin-domain containing-3 یا در اصل گیرنده¬ی شماره¬ی 2 ویروس هپاتیت A (HAVR2) و از جمله گیرنده های مهاری سلول های T جزایر CpG: (CpG islands) ناحیهای از ژنوم است که فرکانس بالایی از مکانهای CG در آن وجود دارد. T-bet: عضو فاکتورهای رونویسی خانواده¬ی T-box است که با فعال سازی بیان سایتوکاین IFN-γ منجر به تعهد به رده-یTh1 می¬گردد. GATA-3: فاکتور رونویسی مربوط به رده¬ی Th2 که بیان آن برای تولید سایتوکاین های رده¬ی Th2، IL-4 وIL-13 حیاتی است. GITR: مخفف عبارت glucocorticoid-induced TNFR-related protein یا ذر بیان دیگر Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 (TNFRSF18) یکی از اعضای خانواده گیرنده های TNF که به میزان بالایی بر سطح سلول های Treg بیان می¬شود. IRF-4: معادل Interferon regulatory factor 4 یکی از فاکتورهای رونویسی که به طور غیرمستقیم با Th17 در ارتباط بوده و گفته می¬شود عامل تمایز این سلول ها از طریق IL-21 می¬باشد microRNA: زیر گروه بزرگی از RNA های غیرکدکننده¬ی تنظیمی 25-17 نوکلئوتیدی که با اتصال به ناحیه¬ی 3 UTR mRNA هدف باعث مهار نسخه برداری یا تخریب mRNA پس از رونویسی می شوند. Ets-1: پروتئین کد شده توسط ژن Ets-1 و یک تنظیم کننده¬ی منفی تمایز سلول های T CD4+ به سلول های Th17. RoRγt : RAR-related orphan receptor gamma ایزوفرم محدودشده به تیموس و یک فاکتور نسخه برداری که عضوی از خانواده¬ی پذیرنده های رتینوئیدی از خانواده¬ی پذیرنده های هسته ای می¬باشد. جواني جمعيت - سقط |
| ذینفعان نتایج طرح | این طرح با هدف بررسی عوامل ایمونولوژیکی و همچنین اپی ژنتیکی دخیل در سقط مکرر در زنان مبتلا به RPL و مقایسه این عوامل با زنان سالم و بارور انجام میگیرد به طوریکه تغییرات این عوامل را در بیماران شناسایی کرده و به این ترتیب میتواند به عنوان معیاری در جهت پیش آگهی بروز سقط در گروه پرخطر مورد استفاده قرار بگیرد. همچنین با شناسایی این تغییرات و تفاوت ها میتوان راهکار های موثر درمانی برای این گروه از بیماران ارائه داد. |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| محمد نوری | همکار اصلی |
| لعیا فرزدی | مشاور |
| سمانه عبدالمحمدی وحید | دانشجوی مالک پایان نامه |
| مهدی یوسفی | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| وحید یونسی | مشاور |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر فراوانی سلولهای Th17 و exhausted Treg و میزان بیان فاکتورهای اپی ژنتیک موثر در تکامل این سلول ها در زنان مبتلا به سقط مکرر افزایش می یابد.متن خبر سقط مکرر (recurrent pregnancy loss) (RPL) در 5-2% زنان در سنین بارداری رخ می دهد و به 2 یا تعداد بیشتر شکست مکرر بارداری قبل از هفته بیستم گفته میشود. اختلالات ایمونولوژیکی از جمله افزایش نسبت Th1/Th2 به سمت پاسخهای Th1، افزایش تعداد و فعالیت کشندگی سلولهای کشنده طبیعی (NK cells)، از علل سقط مکرر هستند. در این بین ما به بررسی اختلالات جمعیتهای سلولی متفاوتی اعم از سلولهای T کمکی (Th17)، و T فرسوده تنظیمی(exhausted Treg) و بیان ژنهای مرتبط و عوامل اپی ژنتیکی موثر بر آنها در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل پرداختیم.
50 نفر از افراد مبتلا به سقط مکرر دارای اختلالات ایمنی سلولی و 50 نفر از زنان با سابقه بارداری موفق به عنوان گروه کنترل در نظر گرفته شدند. جهت شمارش جمعیت Th17 و exhausted Treg از روش فلوسایتومتری استفاده شد. میزان بیان ژنهای مولکولهای RORγt، IRF-4 با تکنیک Quantitative PCR بررسی شدند. نتایج مطالعه ما نشان داد که تعداد سلولهای Th17 و exhausted Treg و سطح بیان ژن های RORγt و IRF-4 به صورت معنی داری در زنان مبتلا به سقط مکرر بیشتر از زنان نرمال بود. |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر فراوانی سلولهای Treg و exhausted T و میزان بیان فاکتورهای اپی ژنتیک موثر در تکامل این سلول ها در زنان مبتلا به سقط مکرر کاهش می یابد.متن خبر سقط مکرر (recurrent pregnancy loss) (RPL) به 2 یا تعداد بیشتر شکست مکرر بارداری قبل از هفته بیستم گفته میشود. ما به بررسی اختلالات جمعیتهای سلولی متفاوتی اعم از سلولهای T تنظیمی (Treg) و سلولهای T فرسوده (exhausted T) و بیان ژنهای مرتبط و عوامل اپی ژنتیکی موثر بر آنها در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل پرداختیم. جهت شمارش جمعیت سلولی از روش فلوسایتومتری استفاده شد. میزان بیان ژنهای مولکولهای Foxp3 و GITR با تکنیک Quantitative PCR بررسی شدند. نتایج مطالعه ما نشان داد که فراوانی سلولهای Treg و exhausted T به صورت معنی داری در زنان مبتلا به سقط مکرر کمتر از زنان نرمال بود. مقایسه میزان بیان ژن-های Foxp3 و GITR در زنان مبتلا به سقط مکرر، نشان دهنده کاهش معنی دار بیان به هنگام مقایسه با افراد نرمال بود. افزایش پارامترهای پیش التهابی و نیز کاهش پارامترهای مهاری در زنان مبتلا به سقط مکرر در مقایسه با گروه کنترل بیانگر نقش غیرقابل انکار سیستم ایمنی در روند یک بارداری موفق است. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
